目的明確腦外傷中,Dystroglycan（DG）是否和水通道蛋白4（Aquaporin4,AQP4）表達(dá)變化有關(guān),明確AQP4的極性表達(dá)是否依賴于星形膠質(zhì)細(xì)胞中細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）的激活以及DG是否參與了信號傳導(dǎo),并最終導(dǎo)致ERK通路的激活。方法用SD乳鼠腦組織星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),以離體劃傷模型模擬在體的腦損傷。分別設(shè)立劃傷組和對照組。用免疫熒光、免疫印跡及RT-PCR方法來檢測劃傷后各時間點(diǎn)（1h,6h,12h,24h）AQP4、DG和P-ERK等蛋白劃傷后較正常組的表達(dá)變化。在所檢測蛋白變化最明顯的時間點(diǎn),應(yīng)用ERK的激動劑和抑制劑分別作用于劃傷細(xì)胞后,用上述免疫化學(xué)方法檢測各相關(guān)蛋白表達(dá)變化。在所檢測的蛋白變化最顯著的時間點(diǎn),用siRNA沉默DG的表達(dá),再在劃傷模型中檢測蛋白變化情況。結(jié)果劃傷后,與正常組比較,AQP4和DG的共表達(dá)模式,從代表極性的點(diǎn)狀,變?yōu)槿诤系拇髩K狀,表明AQP4的極性表達(dá)在劃傷后1-6 h嚴(yán)重破壞;而1-6 h磷酸化ERK的表達(dá)明顯增高（p<0.01）,且與AQP... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

免疫熒光標(biāo)記GFAP鑒定星形膠質(zhì)細(xì)胞Figure1IdentificationofastrocytesbyimmunofluorescencelabelingGFAP

212免疫熒光雙標(biāo)顯示星形膠質(zhì)細(xì)胞劃傷后1h,6h,12h ,24h AQP4和α-DG表達(dá)改變（P4：AQP4，色熒光；α-D:α-DG，紅色熒光；DAPI:藍(lán)色熒光。1 N：1h 正常組，1S:1h 劃傷組; 6N：h 正常組，6S:6h 劃傷組; 12 N：12h 正常組，12S:12h 劃傷組; 24 N：24h 正常組，24S:24h傷組）igure 2 Coexpression of AQP4 and α-DG at 1h，6h，12h，24h in astrocytes followingcratch-injurydetected by immunofluorescence

22圖3免疫熒光雙標(biāo)顯示星形膠質(zhì)細(xì)胞劃傷后1h,6h,12h ,24h AQP4和β-DG表達(dá)改變（P4：AQP4，綠色熒光；β-D: β-DG,紅色熒光；DAPI:藍(lán)色熒光。1 N：1h 正常組，1S:1h 劃傷組; 6N：6h 正常組，6S:6h 劃傷組; 12 N：12h 正常組，12S:12h 劃傷組; 24 N：24h 正常組，24S:24h劃傷組）Figure 3 Coexpression of AQP4 and β-DG at 1h，6h，12h，24h in astrocytes followingscratch-injury detected by immunofluorescence3.3 PCR 結(jié)果RT-PC 結(jié)果表明劃傷后 AQP4 mRNA 表達(dá)較正常組比較明顯增加（P＜0.01），

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3340946