研究背景增生性瘢痕（hypertrophic scar）及瘢痕疙瘩（keloid）是傷口愈合過(guò)程調(diào)節(jié)異常導(dǎo)致的一類(lèi)纖維化疾病,以成纖維細(xì)胞過(guò)度增殖,表皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,肌成纖維細(xì)胞增多,細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）過(guò)度沉積為主要特征。二者組織學(xué)方面差異不明顯,臨床表現(xiàn)則各異,增生性瘢痕常常局限于受傷部位,高出皮膚表面,偶有疼痛、瘙癢等不適,發(fā)展時(shí)限常超過(guò)1年,但存在一定的自限性,隨著時(shí)間的延長(zhǎng)可逐漸萎縮;而瘢痕疙瘩則常常超出病變邊緣,具有侵襲性,明顯高出皮膚表面,有疼痛、痙癢的癥狀出現(xiàn),發(fā)展時(shí)限可長(zhǎng)達(dá)數(shù)年,不能隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而自行改善。且由于此類(lèi)疾病的病理生理機(jī)制復(fù)雜,臨床上一直缺乏有效的治療手段。近年來(lái),干細(xì)胞被廣泛應(yīng)用到臨床治療中,大量的研究表明,間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）可以促進(jìn)組織的高質(zhì)量愈合。而脂肪來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSCs）相較于其它種類(lèi)的間充質(zhì)干細(xì)胞具有來(lái)源廣泛,供區(qū)損傷小,組織相容性好的優(yōu)點(diǎn)。但目前關(guān)于脂肪來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)增生性瘢痕以及瘢痕疙瘩來(lái)源的成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為影響以及相關(guān)作用機(jī)制的研究尚未完善�，F(xiàn)有研究表明,TGF-β1的... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１?Ｍ?ｅＭｅｇａｆｌｉｇｅ離心機(jī)?附

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院?博士研宄生學(xué)位論文??狀，移入５０ｍｌ離心管，加入等體積的０．０７５％的Ｉ型膠原酶，置于搖床上消化４５ｍｉｎ??（３７〇Ｃ，?１８０ｒ／ｍｉｎ）；??２）消化后的脂肪顆粒加入等體積的含１０％胎牛血清的間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基??終止消化，１００目濾網(wǎng)過(guò)濾，濾液離心３ｍｉｎ?（１０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ）；??３）棄上清后所得沉淀用５ｍｌ完培重懸，細(xì)胞計(jì)數(shù)后適當(dāng)稀釋，以ｌＸｌ〇５／ｃｍ２的??密度接種于培養(yǎng)皿中，置于３７°Ｃ含５％Ｃ０２的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，獲取原代細(xì)胞Ｐ０。??４８?ｈ后首次換液去除未貼壁細(xì)胞，此后每７２ｈ換液一次；??４）待細(xì)胞長(zhǎng)至８０％?—?９０％融合時(shí)ＰＢＳ漂洗兩次，０．２５％胰酶ｌｍｌ培養(yǎng)箱孵育??２－３ｍｍ，低倍鏡下觀察細(xì)胞縮小變圓，脫壁后加入等體積完培終止消化；??５）細(xì)胞懸液離心３ｍｉｎ?（１０００ｒｐｍ／ｍｉｎ）后棄上清，以間充質(zhì)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基??重懸，充分輕柔吹打至均勻后１：３傳代，同法傳代培養(yǎng)至Ｐ３備用。??

附圖１?Ｍ?ｅＭｅｇａｆｌｉｇｅ離心機(jī)?附圖２層流超凈臺(tái)內(nèi)提取原代細(xì)胞??２．２ｈＡＤＳＣｓ表面標(biāo)記物的流式鑒定??１）Ｐ３代ｈＡＤＳＣｓ消化離心后以ＰＢＳ重懸細(xì)胞團(tuán)，計(jì)數(shù)細(xì)胞密度，調(diào)整至１Ｘ１０６??個(gè)／ｍｌ，分裝至ＥＰ管，每管ｌｍｌ；??２）將抗人?ＣＤ９０、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ１０５、ＣＤ７３、ＣＤ１０６?分別加入分裝好的?ＥＰ??管中，４°Ｃ避光孵育３０ｍｉｎ；??３）細(xì)胞懸液４°Ｃ離心，以預(yù)冷的ＰＢＳ洗滌３次去除未結(jié)合的抗體，ＰＢＳ重懸；??４）３００目細(xì)胞篩過(guò)濾后加等量鞘液，搖勻后上機(jī)，流式細(xì)胞儀記錄結(jié)果并分析。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β3對(duì)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的生物學(xué)作用（英文）[J]. 唐世杰,胡素鑾,王玉銀,申紀(jì)奎.  中國(guó)臨床康復(fù). 2004(17)



本文編號(hào)：3321974