目的:探討異丹葉大黃素（Isorhapontigenin,ISO）和白藜蘆醇（Resveratrol,RES）抑制骨肉瘤K7M2細(xì)胞生長(zhǎng)及免疫調(diào)節(jié)的作用,并明確相應(yīng)的細(xì)胞和分子機(jī)制,為骨肉瘤的治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:（1）不同濃度的ISO和RES體外處理K7M2細(xì)胞,MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。（2）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ISO和RES對(duì)K7M2細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響。（3）實(shí)時(shí)定量多聚酶鏈聚合反應(yīng)（RT-qPCR）檢測(cè)ISO和RES對(duì)K7M2細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期相關(guān)基因表達(dá)量的影響。（4）蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)ISO和RES對(duì)K7M2細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期相關(guān)蛋白表達(dá)量的影響。（5）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ISO和RES在體外對(duì)K7M2細(xì)胞表面MHC分子表達(dá)量的影響。（6）構(gòu)建荷骨肉瘤小鼠模型,每天監(jiān)測(cè)腫瘤體積及小鼠體重,并根據(jù)小鼠體重于瘤周注射不同濃度的ISO和RES,第16 d處死小鼠并獲取肝、腎和移植瘤組織,將肝腎組織染色觀察藥物毒副作用,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞表面MHC分子表達(dá)量和移植瘤組織中浸潤(rùn)的CD8⁺T細(xì)胞、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、MDSCs和T... 

【文章來(lái)源】：三峽大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ISO和RES顯著抑制K7M2細(xì)胞增殖注：ISO和RES處理K7M2細(xì)胞后，MTT檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)；A、B，ISO組（A）

24圖 2.2 ISO 和 RES 顯著誘導(dǎo) K7M2 細(xì)胞凋亡：A、C， ISO（A）和 RES（C）處理 K7M2 細(xì)胞后用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果代圖，橫坐標(biāo)為熒光素 PE 標(biāo)記的 Annexin V（重組膜黏連蛋白 5）染色，縱坐標(biāo)為 7-AAD 染色；下象限為早期凋亡細(xì)胞，右上象限為晚期凋亡細(xì)胞，左上象限為壞死細(xì)胞，左下象限為存活細(xì)；B、D，ISO 組（B）和 RES 組（D）統(tǒng)計(jì)分析圖，取凋亡細(xì)胞（右上加右下象限）、壞死細(xì)和存活細(xì)胞數(shù)值統(tǒng)計(jì)分析，n=3，NS 代表用藥組與 DMSO 組相比較無(wú)顯著性差異；*代表用藥與 DMSO 組相比較，P＜0.05；**代表用藥組與 DMSO 組相比較，P＜0.01；***代表用藥組與MSO 組相比較，P＜0.001.1.3 ISO 和 RES 顯著阻滯骨肉瘤細(xì)胞 K7M2 細(xì)胞周期進(jìn)程流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)，如圖 2.3A、B 所示，與 DMSO 組 G0/G1 期的

圖 2.3 ISO 和 RES 阻滯 K7M2 細(xì)胞周期進(jìn)程注：A、C，ISO（A）和 RES（C）處理 K7M2 細(xì)胞后用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果代表圖；B、D，ISO 組（B）和 RES 組（D）統(tǒng)計(jì)分析圖，取細(xì)胞周期各階段百分比數(shù)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，n=3，NS 代表用藥組與 DMSO 組相比較無(wú)顯著性差異；*代表用藥組與 DMSO 組相比較，P＜0.052.1.4 ISO和RES對(duì)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期相關(guān)基因mRNA和蛋白水平表達(dá)量的影響2.1.4.1 RT-qPCR 結(jié)果RT-qPCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：圖 2.4A 所示，與對(duì)照組（DMSO 組）相比較，40 μM ISO處理后，K7M2細(xì)胞X連鎖凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP)鼠類(lèi)肉瘤病毒癌基因（kirsten rat sarcoma viral oncogene, Kras), Mcl-1 基因（myeloidcell leukemia-1）, B 淋巴細(xì)胞瘤-2 基因（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）和 CyclinD1 mRNA


本文編號(hào)：3308840