發(fā)布時(shí)間：2021-07-16 14:35

　　[目的]三七皂苷R1是五加科多年生草本植物三七的特征性成分。前期研究顯示三七皂苷R1可誘導(dǎo)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡,具體作用機(jī)制不清[1]。本文通過不同濃度(20μg/ml-200μg/ml 三七皂苷R1對體外培養(yǎng)人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),觀察三七皂苷R1對體外瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡的影響,篩選最佳濃度為 120μg/ml,作用 48 小時(shí)后,觀察 Wnt5a、β-catenin、GSK-3β、β-GSK-3β蛋白及mRNA水平的變化。探討三七皂苷R1誘導(dǎo)人瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用,為臨床防治瘢痕疙瘩提供分子及病理學(xué)水平的理論依據(jù)。[方法]收集人瘢痕疙瘩組織（keloid,K）及正常皮膚組織（nomal skin,NS）,應(yīng)用組織塊法分離原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞（fibroblastcell,FC）,進(jìn)行成纖維細(xì)胞鑒定及繪制生長曲線,用不同濃度（20μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml、80μg/ml、90μg/ml、100μg/ml、110μg/ml、120μg/ml、130μg/ml、140μg... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１瘢痕疙瘩圖片??瘢痕疙瘩組織病理以成纖維細(xì)胞過度增殖、毛細(xì)血管及膠原增生、排列紊??

含有Ｔ細(xì)胞因子（Ｔ?ｃｅｌｌ?ｆａｃｔｏｒ，?ＴＣＦ）家族轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，與轉(zhuǎn)錄活化因子結(jié)合??后，激活下游靶基因的轉(zhuǎn)錄發(fā)揮作用??經(jīng)典的Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路（見圖２）主要在細(xì)胞增殖、遷移和凋亡??等過程起重要作用［１１］。大量研究發(fā)現(xiàn)：Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ在經(jīng)典的Ｗｎｔ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起??著開關(guān)調(diào)節(jié)的決定性作用，是關(guān)鍵的信號(hào)傳遞分子。具體分子機(jī)制為：當(dāng)胞外沒??有Ｗｎｔ信號(hào)時(shí)，胞質(zhì)內(nèi)少量的ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ與不同分子組成復(fù)合物，包括軸蛋白（ａｘｉｎ）、??酪蛋白激酶ｌ（ｃａｓｅｉｎ?ｋｉｎａｓｅ?１，?ＣＫ１）、腸腺瘤息肉蛋白（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ?ｐｏｌｙｐｏｓｉｓ?ｃｏｌｉ??ｇｅｎｅ，?ＡＰＣ）和糖原合成激酶３（ｇｌｙｃｏｇｅｎ?ｓｙｎｔｈａｓｅ?ｋｉｎａｓｅ?３，?ＧＳＫ３）。Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ的Ｓｅｒ４５??殘基被ＣＫｌａ磷酸化，促進(jìn)Ｓｅｒ３３?／?Ｓｅｒ３７、Ｔｈｒ４１殘基被ＧＳＫ－３Ｐ磷酸化，進(jìn)而被??ｐ－ＴｒＣＰ識(shí)別泛素化并最終降解，Ａｘｉｎ可以增強(qiáng)這種作用。在此狀態(tài)下，Ｔ細(xì)胞因??子?／?淋巴增強(qiáng)因子（Ｔ?ｃｅｌｌ?ｆａｃｔｏｒ?／?ｌｙｍｐｈｏｉｄ?ｅｎｈａｎｃｉｎｇ?ｆａｃｔｏｒ，?ＴＣＦ?／?ＬＥＦ）和組蛋白??乙酰酶（ｈｉｓｔｏｎｅ?ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ

??三七皂苷Ｒ１是三七的特征性成分，分子式為Ｃ４７Ｈ８０ＯＩ８，分子量９３３．１３１??（見圖３）。研究證實(shí)其可誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞株ＨＬ－６（Ｐ】、ＨｅＬａ細(xì)胞１２１］凋亡，??抗肝、腎纖維化［１９ｉ。有研究證明三七皂苷Ｒ１可降低ＮＭＤＡ誘導(dǎo)的肝纖維化??大鼠肝組織及血清中的ＴＧＦ－ｐｉ／Ｓｍａｄ３的表達(dá)，從而發(fā)揮了抑制肝纖維化的作??用［２（）］。瘢痕疙瘩主要以成纖維細(xì)胞過度增殖、細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積所致，成纖??維細(xì)胞是瘢痕疙瘩發(fā)生發(fā)展的核心細(xì)胞，如果能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡，將為瘢痕??疙瘩的治療帶來希望。Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞增殖和凋亡中扮演重要??角色，三七皂苷Ｒ１是否能誘導(dǎo)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡？在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過??程中是否通過千預(yù)Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來實(shí)現(xiàn)？??ｏ＾〇Ｈ??ｏ－Ｖ＾ｏｈ??％０Ｈ??圖３三七皂苷Ｒ１的分子結(jié)構(gòu)??本研究將探討三七阜音Ｒ１對Ｗｎｔ／（３－ｃａｔｅｎｉｎ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。通過體??外分離培養(yǎng)正常皮膚成纖維細(xì)胞及瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞，用不同濃度三七皂苷??Ｒ１干預(yù)，觀察三七皂苷Ｒ１對人瘢痕疙瘩（ｋｅｌｏｉｄ）成纖維細(xì)胞Ｗｎｔ／ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ信??號(hào)通路中多個(gè)相關(guān)信號(hào)蛋白分子活化的變化情況，以及對細(xì)胞增殖、凋亡的影響。??１４??

【參考文獻(xiàn)】：
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