發(fā)布時間：2021-06-10 14:37

　　目的:流式細(xì)胞分選技術(shù)分選人骨肉瘤細(xì)胞系MG-63細(xì)胞中側(cè)群（side population,SP）細(xì)胞和非側(cè)群（non-side population,NSP）細(xì)胞。人全基因表達(dá)譜芯片（Human HT-12 v4 Expression Beadchip）檢測兩種細(xì)胞基因表達(dá)差異,分析比較和表達(dá)驗證后獲得候選基因。最后采用基因過表達(dá)和沉默技術(shù)驗證候選基因與腫瘤細(xì)胞干性的調(diào)控關(guān)系,為發(fā)現(xiàn)骨肉瘤治療靶點和臨床診斷標(biāo)記物提供理論依據(jù)。方法:1.根據(jù)SP細(xì)胞具有將熒光染料Hoechst 33342外排而使細(xì)胞呈弱熒光信號這一特性,使用流式細(xì)胞分選技術(shù)分選人骨肉瘤細(xì)胞系MG-63細(xì)胞中SP和NSP細(xì)胞。2.MTT實驗、熒光定量PCR驗證從MG-63細(xì)胞中分選出的SP和NSP細(xì)胞的干性。3.提取分選后的SP和NSP細(xì)胞RNA,進(jìn)行人全基因表達(dá)譜芯片分析。4.使用GO聚類和KEGG通路富集對差異表達(dá)基因進(jìn)行功能分析。5.熒光定量PCR對篩選出的差異表達(dá)最大的前10個基因進(jìn)行表達(dá)驗證。6.構(gòu)建候選差異基因過表達(dá)或者沉默的慢病毒質(zhì)粒。并通過熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)評估轉(zhuǎn)染效率。7.CCK-8和平板克隆實... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

激光共聚焦顯微鏡下觀察分選后的細(xì)胞熒光強度

總RNA瓊脂糖凝膠電泳

標(biāo)準(zhǔn)化SP和NSP后的主成分分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高轉(zhuǎn)移潛能肝癌HCCLM3細(xì)胞中側(cè)群細(xì)胞的分離及其干細(xì)胞特性鑒定[J]. 郭哲,向邦德,姜經(jīng)航,張俊,鐘艷平,蘇節(jié),黎樂群.  中國腫瘤生物治療雜志. 2015(02)
[2]卵巢癌SKOV3細(xì)胞中側(cè)群細(xì)胞的生物學(xué)特性[J]. 鐘艷平,孟泳圳,李力,尹富強,黎丹戎,張瑋.  腫瘤防治研究. 2014(12)
[3]干細(xì)胞標(biāo)志物在卵巢癌SKOV3細(xì)胞側(cè)群細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 鐘艷平,孟泳圳,蘇節(jié),李力,黎丹戎,張瑋.  中國腫瘤生物治療雜志. 2014(05)
[4]卵巢癌側(cè)群細(xì)胞流式分選方法的建立及探討[J]. 孟泳圳,李力,鐘艷平,張瑋.  廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2013(02)



本文編號：3222559