椎間盤退變性疾�。―egenerative disc disease,DDD）臨床極其常見,是引起頸肩腰腿疼痛的主要原因之一。資料顯示,我國DDD患病率逐年上升,已成為嚴(yán)重影響大眾健康和生活質(zhì)量的主要疾病之一。目前DDD的治療方法主要包括藥物對癥和手術(shù)治療等,但這些治療均未能針對椎間盤退變的病理生理過程,遠(yuǎn)期療效不令人滿意。近年來,細(xì)胞移植和基因治療等生物學(xué)方法逐漸成為DDD治療的研究熱點(diǎn),并有望在退變早期有效阻止或逆轉(zhuǎn)椎間盤退變過程。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn),椎間盤退變始發(fā)于髓核,最主要病理特征是髓核細(xì)胞總數(shù)量減少、細(xì)胞外基質(zhì)合成代謝與分解代謝失平衡,具體表現(xiàn)為椎間盤內(nèi)髓核細(xì)胞凋亡減少,Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖等細(xì)胞外基質(zhì)合成減少、降解增多,而炎癥反應(yīng)在此過程中起著關(guān)鍵性作用。針對此病理特征,學(xué)者們嘗試通過細(xì)胞移植和生長因子注射等生物學(xué)方法修復(fù)退變的髓核。然而,研究結(jié)果表明,現(xiàn)有的生物學(xué)方法依然未能阻止或逆轉(zhuǎn)椎間盤退變過程,修復(fù)效果遠(yuǎn)未達(dá)到預(yù)期目標(biāo),距離臨床應(yīng)用尚有很大的距離。椎間盤是人體最大無血管組織,局部為一特異性酸性環(huán)境。最新研究發(fā)現(xiàn),退變椎間盤酸性環(huán)境也是導(dǎo)致髓核退變的關(guān)鍵因素之一。因椎間... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

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縮寫詞表
緒論
    1. 椎間盤退變的治療現(xiàn)狀
    2. 髓核退變的生物學(xué)治療
    3. 椎間盤特有酸性微環(huán)境與髓核退變的關(guān)系
    4. GPR4與炎癥相關(guān)信號通路的聯(lián)系
    參考文獻(xiàn)
第一章 體外退變椎間盤酸性環(huán)境下GPR4調(diào)控髓核退變的作用研究
    1.1 引言
    1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        1.2.1 試劑與耗材
        1.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器、材料與器械
        1.2.3 相關(guān)溶液的配置
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 髓核細(xì)胞分離培養(yǎng)
        1.3.2 細(xì)胞凍存
        1.3.3 細(xì)胞復(fù)蘇
        1.3.4 髓核細(xì)胞的番紅O、甲苯胺藍(lán)和阿利新藍(lán)染色
        1.3.5 模擬椎間盤微環(huán)境的酸性培養(yǎng)液的制備
        1.3.6 實(shí)時(shí)定量PCR檢測
        1.3.7 Western Blot
        1.3.8 基因轉(zhuǎn)染和RNA干擾(RNA interference,RNAi)
        1.3.9 CCK-8檢測細(xì)胞增殖
        1.3.10 細(xì)胞免疫熒光
        1.3.11 細(xì)胞免疫組化
        1.3.12 統(tǒng)計(jì)分析
    1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.4.1 髓核細(xì)胞的分離培養(yǎng)及染色
        1.4.2 退變椎間盤酸性環(huán)境下髓核細(xì)胞高表達(dá)GPR4
        1.4.3 髓核細(xì)胞GPR4的過表達(dá)(overexpression)和敲除(knockdown)
        1.4.4 退變椎間盤酸性環(huán)境下GPR4表達(dá)變化與炎癥介質(zhì)、細(xì)胞外基質(zhì)降解酶的表達(dá)水平的關(guān)聯(lián)
        1.4.5 退變椎間盤酸性環(huán)境下GPR4表達(dá)變化與聚集蛋白聚糖和Ⅱ型膠原表達(dá)水平的關(guān)聯(lián)
        1.4.6 嚴(yán)重退變椎間盤酸性環(huán)境下過表達(dá)與敲除GPR4后阿利新藍(lán)染色
    1.5 討論
    1.6 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二章 GPR4介導(dǎo)cAMP蓄積調(diào)控髓核退變的具體分子機(jī)制研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        2.2.1 試劑與耗材
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器、材料與器械
        2.2.3 相關(guān)溶液的配置
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 EIA法檢測髓核細(xì)胞內(nèi)cAMP的蓄積水平
        2.3.2 ELISA法檢測培養(yǎng)液IL-1β、iNOS、TNF-α、MMP-3,13和ADAMTS-5
        2.3.3 Western Blot
        2.3.4 統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 退變椎間盤酸性微環(huán)境下髓核細(xì)胞cAMP的蓄積水平
        2.4.2 GPR4參與調(diào)控髓核細(xì)胞在退變椎間盤酸性環(huán)境下JNK和p38 MAPK的磷酸化水平
        2.4.3 信號分子cAMP和PKA參與GPR4調(diào)控JNK和p38 MAPK的磷酸化水平的作用
        2.4.4 退變椎間盤酸性微環(huán)境下JNK和p38 MAPK信號通路對炎癥介質(zhì)與細(xì)胞外基質(zhì)降解酶的調(diào)控
    2.5 討論
    2.6 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第三章 體內(nèi)水平GPR4調(diào)控髓核退變的具體作用研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器
        3.2.1 試劑與耗材
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器、材料與器械
        3.2.3 相關(guān)溶液的配置
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)動物的分組
        3.3.2 建立椎間盤退變動物模型與藥物注射
        3.3.3 Real-time PCR檢測
        3.3.4 鉬靶X線檢查及椎間盤高度指數(shù)(disc heightindex,DHI)計(jì)算
        3.3.5 磁共振檢查
        3.3.6 組織學(xué)染色
        3.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 GPR4的敲除水平
        3.4.2 椎間盤X線檢查結(jié)果
        3.4.3 椎間盤MRI檢查結(jié)果
        3.4.4 椎間盤組織學(xué)染色結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡歷及在學(xué)期間所取得的科研成果



本文編號：3200605