目的研究絲切蛋白（cofilin）表達(dá)對軟骨細(xì)胞表型及骨架的影響。方法通過siRNA及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染分別構(gòu)建cofilin低表達(dá)和高表達(dá)模型,對表達(dá)不同水平cofilin的軟骨細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞骨架及相關(guān)蛋白的檢測,以研究cofilin對軟骨細(xì)胞表型及骨架方面的影響。結(jié)果在軟骨細(xì)胞中敲降cofilin蛋白后,用鬼筆環(huán)肽染色觀察到軟骨細(xì)胞骨架變得更為緊湊,在細(xì)胞延伸方向的肌動蛋白密度較對照組相比更為密集,同時(shí)軟骨細(xì)胞中COLⅠ（Ⅰ型膠原蛋白）的表達(dá)水平稍增高（137.42%?25.14%）,結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）,而COLⅡ（II型膠原蛋白）表達(dá)水平明顯降低（19.96%?14.59%）,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在軟骨細(xì)胞中過表達(dá)cofilin蛋白后,用免疫熒光染色觀察到軟骨細(xì)胞中細(xì)胞骨架的熒光強(qiáng)度較對照組稍暗,且分布稍廣,COLⅠ表達(dá)降低（44.47%?21.67%）,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）,而COLⅡ表達(dá)稍增高（116.16%?13.18%）,結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論Cofilin蛋白對軟骨細(xì)胞骨架具有重要的作用;Cofilin... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1.引言
2.文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
3.技術(shù)路線圖
4.材料和方法
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 主要試劑
        4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)器材與設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟
        4.2.1 軟骨細(xì)胞分離及培養(yǎng)
        4.2.2 質(zhì)粒提取
        4.2.3 質(zhì)粒抽提
        4.2.4 Cofilin高、低表達(dá)模型構(gòu)建
        4.2.5 免疫熒光染色
        4.2.6 RT-PCR
        4.2.7 Western Blot
        4.2.8 數(shù)據(jù)分析
5.結(jié)果
    5.1 兔軟骨細(xì)胞提取實(shí)驗(yàn)圖
    5.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    5.3 低表達(dá)模型檢測
        5.3.1 Cofilin低表達(dá)水平模型篩選
        5.3.2 Cofilin低表達(dá)水平模型cofilin蛋白檢測
        5.3.3 Cofilin低表達(dá)水平模型COLⅠ、COLⅡ蛋白檢測
    5.4 高表達(dá)模型檢測
        5.4.1 Cofilin高表達(dá)水平模型cofilin蛋白檢測
        5.4.2 Cofilin高表達(dá)水平模型COLⅠ、COLⅡ蛋白檢測
    5.5 細(xì)胞骨架熒光強(qiáng)度分析
6.討論
7.結(jié)論
8.展望
參考文獻(xiàn)
中英文縮寫詞及對照表
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
在讀期間參與發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人髕下脂肪墊干細(xì)胞與骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞間接共培養(yǎng)可促進(jìn)其向軟骨細(xì)胞分化[J]. 楊君君,陳誠,楊柳,宋雄波,謝文斌,黃術(shù),劉寶榮.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2017(02)
[2]軟骨仿生基質(zhì)體外誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為軟骨細(xì)胞樣細(xì)胞[J]. 吳江怡,王富友,楊柳,廖瑛.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2015(11)
[3]調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞骨架蛋白對成軟骨表型的影響[J]. 宋雄波,吳江怡,黃術(shù),陳誠,楊柳,劉寶榮.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(21)
[4]不同年齡兔軟骨細(xì)胞培養(yǎng)和形態(tài)學(xué)研究[J]. 李昊.  山西職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(01)

碩士論文
[1]間接共培養(yǎng)人髕下脂肪墊干細(xì)胞與骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 楊君君.湖南師范大學(xué) 2018
[2]Rho/ROCK通路對應(yīng)力調(diào)控成骨細(xì)胞Cofilin及成骨相關(guān)基因表達(dá)作用的研究[D]. 韓雨晨.第四軍醫(yī)大學(xué) 2015
[3]Cofilin信號通路在骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D]. 史野.長春中醫(yī)藥大學(xué) 2012



本文編號：3188177