目的:研究氫氣對氧糖剝奪/再灌注損傷的原代培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞線粒體功能穩(wěn)態(tài)及線粒體自噬的影響。方法:將培養(yǎng)至第七天左右穩(wěn)定成熟的原代海馬神經(jīng)細(xì)胞分為:1.對照組（Control組,正常環(huán)境下培養(yǎng)）;2.氧糖剝奪/再灌注組（OGD/R組,放入缺氧缺糖環(huán)境中2h后再灌注階段放入正常環(huán)境中繼續(xù)24h）;3.氧糖剝奪+氫氣組（OGD/R+H2組,氧糖剝奪2h后再灌注階段放入富氫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h）;4.氧糖剝奪+雷帕霉素組（OGD/R+RAP組,氧糖剝奪2h后再灌注階段培養(yǎng)基中加入雷帕霉素使其濃度達(dá)到200 nmol/L,正常環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)24h）;5.氧糖剝奪+3-甲基腺嘌呤組（OGD/R+3-MA組,氧糖剝奪2h后再灌注階段培養(yǎng)基中加入3-甲基腺嘌呤使其濃度達(dá)到10 mmol/L,正常環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)24h）;6.氧糖剝奪+雷帕霉素+3甲基腺嘌呤組（OGD/R+RAP+3-MA組,氧糖剝奪2h后再灌注階段培養(yǎng)基中加入雷帕霉素和3甲基腺嘌呤使其濃度分別達(dá)到200 nmol/L和10 mmol/L,正常環(huán)境下繼續(xù)培養(yǎng)24h）;7.氧糖剝奪+氫氣+3甲基腺嘌呤組（OGD/R+H2+3-MA... 

【文章來源】：桂林醫(yī)學(xué)院廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英漢縮略詞對照表
前言
1 材料與方法
    1.1 實驗材料與試劑
    1.2 主要實驗儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 原代大鼠海馬神經(jīng)元培養(yǎng)
        1.3.2 氧糖剝奪/再灌注（OGD/R）模型的建立
        1.3.3 實驗設(shè)計與分組
        1.3.4 MTT法檢測神經(jīng)細(xì)胞存活率
        1.3.5 流式細(xì)胞技術(shù)檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡
        1.3.6 DCFH熒光染色檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧水平
        1.3.7 JC-10染色測定線粒體膜電位水平
        1.3.8 質(zhì)粒的構(gòu)建與神經(jīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        1.3.9 免疫熒光檢測線粒體自噬水平
        1.3.10 RT-PCR檢測線粒體自噬相關(guān)基因PINK1、Parkin和LC3的變化
        1.3.11 Western Blot法檢測線粒體自噬相關(guān)蛋白PINK1、Parkin和LC3的表達(dá)
        1.3.12 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 氫氣提高OGD/R損傷后神經(jīng)元的存活率
    2.2 氫氣降低OGD/R損傷后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡水平
    2.3 氫氣降低OGD/R后神經(jīng)細(xì)胞的活性氧水平
    2.4 氫氣抑制OGD/R損傷后神經(jīng)元線粒體膜電位的下降
    2.5 氫氣上調(diào)OGD/R損傷后神經(jīng)元線粒體自噬水平
    2.6 氫氣上調(diào)線粒體自噬相關(guān)基因的表達(dá)
    2.7 氫氣上調(diào)線粒體自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)
3 討論
4 結(jié)論
5 研究不足之處
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]論細(xì)胞色素C、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J]. 魯翠芳,李世英.  求醫(yī)問藥(下半月). 2013(11)
[2]氫氣飽和生理鹽水對局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能缺損、神經(jīng)細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J]. 劉漪,李雪梅,譚永星.  臨床神經(jīng)病學(xué)雜志. 2013(05)



本文編號：3159120