發(fā)布時間：2021-04-18 02:52

　　一、研究背景骨關節(jié)炎（Osteoarthritis，OA）是最常見的關節(jié)疾病,主要發(fā)生在膝關節(jié),臨床表現(xiàn)為膝關節(jié)疼痛、腫脹、僵硬和運動功能障礙。OA一直是研究的熱點,但其發(fā)病機制仍不明確,目前大量研究發(fā)現(xiàn)構成細胞外基質(zhì)蛋白重要組成部分的SLRP家族中的asporin可能與OA的發(fā)病有關,但其具體作用機制目前還不清楚。二、研究目的本研究首先明確asporin在OA關節(jié)軟骨細胞中表達情況,并進一步明確軟骨細胞asporin表達對OA病理改變的影響,最后明確OA病程中,關節(jié)軟骨細胞asporin與TGF-β/Smad信號通路的關系,深入探討軟骨細胞asporin在骨關節(jié)炎病程中的作用及其分子機制,為防治骨關節(jié)炎提供新的潛在靶點。三、研究方法1、收集臨床上OA患者關節(jié)軟骨標本和因嚴重外傷需要截肢的正常膝關節(jié)軟骨標本通過免疫組織化學方法（IHC）檢測asporin在節(jié)軟骨中的表達水平;同時收集骨關節(jié)炎患者與正常人血清標本,通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中asporin表達情況;利用C57/BL6小鼠構建DMM骨關節(jié)炎模型,通過IHC檢測asporin在OA發(fā)生后4周以及8周后關節(jié)軟骨... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２小鼠骨關節(jié)炎模型造模后，關節(jié)軟骨中ａｓｐｏｒｉｎ表達升高

有抑制ａｓｐｏｒｉｎ蛋白表達的作用，同樣是ｓｉ－ＲＮＡ４７９序列效果最為明顯，細胞基??質(zhì)主要成分Ｃ０ＬＬ２與Ａｇｇｒｅｃａｎ的表達上調(diào)，而ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５表達與??對照組相比表達下調(diào)（圖３－２，ｆ）。??外源性ａｓｐｏｒｉｎ是否對軟骨細胞外基質(zhì)的合成和代謝有關，我們同樣利用軟??骨細胞，通過具有活性的外源性ａｓｐｏｒｉｎ重組蛋白刺激軟骨細胞，檢測ＣＯＬＬ２、??Ａｇｇｒｅｃａｎ、ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的表達。實驗結果顯示，重組蛋白ａｓｐｏｒｍ可??明顯抑制ＣＯＬＬ２、Ａｇｇｒｅｃａｎ的表達，促進ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的合成（圖３－２，ｇ），??從而進一步證實了?ａｓｐｏｒｉｎ的表達對于調(diào)節(jié)軟骨細胞外基質(zhì)的合成與代謝具有重??要作用。??｜，〇．?＾?＝＝?＾??ｓ．Ｒ－１０６３??？！?■?ｄ??ｉＭ１８?Ｔ?［ＩＦ?’??：■：；?丁?ｉＭｉ?ｍ??圖３－ｌ?ａｓｐｏｒｉｎ影響軟骨細胞外基質(zhì)代謝。（ａ－ｅ）利用ｓｉ－ＲＮＡ干擾ａｓｐｏｒｉｎ表達后ａｓｐｏｒｉｎ、??二型膠原、聚蛋白多糖、金屬蛋白酶１３、聚蛋白多糖酶５?ＲＴ－ｑＰＣＲ結果（＊Ｐ?＜０．５，?＜??０．０１，＊＊＊Ｐ＜?０．００１，?０．０００１）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｕｓｉｎｇ?ｓｉ－ＲＮＡ?ｔｏ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ?ｗｉｔｈ?ａｓｐｏｒｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：?（ａ－ｅ）?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ??ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｙｐｅ?ＩＩ?ｃｏｌｌａｇｅｎ

有抑制ａｓｐｏｒｉｎ蛋白表達的作用，同樣是ｓｉ－ＲＮＡ４７９序列效果最為明顯，細胞基??質(zhì)主要成分Ｃ０ＬＬ２與Ａｇｇｒｅｃａｎ的表達上調(diào)，而ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５表達與??對照組相比表達下調(diào)（圖３－２，ｆ）。??外源性ａｓｐｏｒｉｎ是否對軟骨細胞外基質(zhì)的合成和代謝有關，我們同樣利用軟??骨細胞，通過具有活性的外源性ａｓｐｏｒｉｎ重組蛋白刺激軟骨細胞，檢測ＣＯＬＬ２、??Ａｇｇｒｅｃａｎ、ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的表達。實驗結果顯示，重組蛋白ａｓｐｏｒｍ可??明顯抑制ＣＯＬＬ２、Ａｇｇｒｅｃａｎ的表達，促進ＭＭＰ－１３、ＡＤＡＭＴＳ－５的合成（圖３－２，ｇ），??從而進一步證實了?ａｓｐｏｒｉｎ的表達對于調(diào)節(jié)軟骨細胞外基質(zhì)的合成與代謝具有重??要作用。??｜，〇．?＾?＝＝?＾??ｓ．Ｒ－１０６３??？！?■?ｄ??ｉＭ１８?Ｔ?［ＩＦ?’??：■：；?丁?ｉＭｉ?ｍ??圖３－ｌ?ａｓｐｏｒｉｎ影響軟骨細胞外基質(zhì)代謝。（ａ－ｅ）利用ｓｉ－ＲＮＡ干擾ａｓｐｏｒｉｎ表達后ａｓｐｏｒｉｎ、??二型膠原、聚蛋白多糖、金屬蛋白酶１３、聚蛋白多糖酶５?ＲＴ－ｑＰＣＲ結果（＊Ｐ?＜０．５，?＜??０．０１，＊＊＊Ｐ＜?０．００１，?０．０００１）??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｕｓｉｎｇ?ｓｉ－ＲＮＡ?ｔｏ?ｉｎｔｅｒｆｅｒｅ?ｗｉｔｈ?ａｓｐｏｒｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：?（ａ－ｅ）?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ??ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ?ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｙｐｅ?ＩＩ?ｃｏｌｌａｇｅｎ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Activation of mTORC1 in subchondral bone preosteoblasts promotes osteoarthritis by stimulating bone sclerosis and secretion of CXCL12[J]. Chuangxin Lin,Liangliang Liu,Chun Zeng,Zhong-Kai Cui,Yuhui Chen,Pinling Lai,Hong Wang,Yan Shao,Haiyan Zhang,Rongkai Zhang,Chang Zhao,Hang Fang,Daozhang Cai,Xiaochun Bai.  Bone Research. 2019(01)
[2]骨關節(jié)炎流行病學研究[J]. 劉康妍,鄭聰,胡海瀾.  中華關節(jié)外科雜志(電子版). 2017(03)
[3]骨關節(jié)炎與Asporin基因多態(tài)性關聯(lián)性的Meta分析[J]. 蔣小紅,肖增明,蔣俊俊,李世德.  中國組織工程研究與臨床康復. 2011(04)
[4]膝骨性關節(jié)炎與asporin基因多態(tài)性關系[J]. 邵振興,秦江輝,戴進,徐勇,易龍,史冬泉,蔣青.  中國公共衛(wèi)生. 2008(05)

碩士論文
[1]炎性因子對人牙周細胞表達Asporin影響的實驗研究[D]. 胡嬌.南方醫(yī)科大學 2014



本文編號：3144654