CXCL12/CXCR4/MMP-2信號通路對三陰型乳腺癌生物學行為的影響
發(fā)布時間：2021-04-15 23:04
目的探討CXCL12/CXCR4/MMP-2信號通路對三陰型乳腺癌增殖和遷移等生物學行為的影響。方法通過脂質體介導的瞬時轉染CXCR4-siRNA和pc DNA3.1-CXCR4,提取MDA-MB-231細胞中RNA和蛋白質,分別用RT-PCR和Western blot法檢測各組細胞中CXCR4、CXCL12及MMP-2的mRNA和蛋白質的表達變化,應用MTT實驗和劃痕實驗檢測轉染后腫瘤細胞的增殖和遷移能力的改變。結果轉染CXCR4-siRNA后實驗組細胞中CXCR4 mRNA及蛋白表達減少（P<0.01）,CXCL12mRNA及蛋白表達增加（P<0.01）,MMP-2 mRNA及蛋白表達減少（P<0.01）;MTT實驗和劃痕實驗結果顯示轉染后72 h細胞的增殖能力下降,劃痕愈合遲緩;轉染pc DNA3.1-CXCR4后實驗組細胞中CXCR4 mRNA及蛋白表達上調（P<0.01）,CXCL12 mRNA及蛋白表達降低（P<0.01）,MMP-2 mRNA及蛋白表達增加（P<0.01）,MTT實驗和劃痕實驗結果顯示轉染后72h細胞的增殖能力增加,劃痕...
【文章來源】：臨床與實驗病理學雜志. 2017,33(11)北大核心CSCD
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細胞中CXCＲ4mＲNA水平表達A．轉染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01
圖1Westernblot檢測CXCＲ4-siＲNA(A)和pcDNA3.1-CXCＲ4(B)轉染MDA-MB-231細胞后CXCＲ4、CXCL12及MMP-2蛋白的表達及MMP-2mＲNA的相對表達量。結果顯示:轉染CXCＲ4-siＲNA后CXCＲ4的mＲNA表達量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表達量顯著高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表達量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01);轉染pcDNA3.1-CXCＲ4后CXCＲ4的mＲNA表達量顯著高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表達量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表達量顯著高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01，圖2～4)。2．3劃痕實驗檢測分別轉染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231細胞遷移能力的變化沿6孔板的直徑均勻用力劃痕后，轉染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4，檢測干擾CX-CＲ4基因的表達對MDA-MB-231細胞遷移能力的影響。從倒置顯微鏡中細胞劃痕的圖像可見，在轉染CXCＲ4-siＲNA72h后與空白對照組和陰性對照組相比，實驗組細胞間距寬于對照組，愈合距離比大于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，提示轉染CXCＲ4-siＲNA后細胞的遷移能力下降，劃痕愈合遲緩，下調CXCＲ4基因的表達可抑制腫瘤細胞的遷移;在轉染pcDNA3.1-CXCＲ472h后與空白對照組和陰性對照組相比，實驗組細胞間距窄于對照圖2ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細胞中CXCＲ4mＲNA水平表達A．轉染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01圖3ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細胞中CXCL12mＲNA水平表達A．轉染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01臨床與實驗病理學雜志JClinExpPathol2017Nov;33(11)·1205·
組，愈合距離比小于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01，圖5)，提示轉染pcDNA3.1-CXCＲ4后細胞的遷移能力增強，劃痕愈合加快，上調CXCＲ4基因的表達可促進腫瘤細胞的遷移。圖4ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細胞中MMP-2mＲNA水平表A．轉染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01圖5細胞劃痕實驗檢測CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4轉染MDA-MB-231后細胞遷移能力變化2．4MTT實驗檢測分別轉染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231細胞增殖能力的變化應用MTT法檢測各組細胞的增殖能力，結果顯示:CXCＲ4-siＲNA轉染MDA-MB-231細胞48、72、96h后，實驗組細胞增殖能力較陰性對照組和空白對照組降低，其中以72h降低最為顯著，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);陰性對照組和空白對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，提示下調CXCＲ4的表達能夠顯著抑制MDA-MB-231細胞的增殖能力。pcDNA3.1-CXCＲ4轉染MDA-MB-231細胞48、72、96h后，實驗組細胞增殖能力與陰性對照組和空白對照組相比顯著增加，其中以72h降低最為顯著，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);陰性對照組與空白對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05，圖6)。提示下調CXCＲ4的表達能夠顯著促進MDA-MB-231細胞的增殖能力。圖6MTT實驗檢測轉染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后細胞增殖能力的變化3討論乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，WHO(2014)乳腺腫瘤分類的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示乳腺癌占女性腫瘤的16%，每年約50萬以上的患者死亡。其中三陰型乳腺癌占浸潤性乳腺癌的15%～20%，具有侵襲性強、病理分級高和廣泛的淋巴結轉移，且在年輕患者中更為常見［3］。與其他亞型的乳腺癌相比，三陰型乳腺癌患者在治療2～3年后發(fā)生遠處轉移和早期復發(fā)的可能性較高，患者
本文編號：3140258
【文章來源】：臨床與實驗病理學雜志. 2017,33(11)北大核心CSCD
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【部分圖文】：
ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細胞中CXCＲ4mＲNA水平表達A．轉染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01
圖1Westernblot檢測CXCＲ4-siＲNA(A)和pcDNA3.1-CXCＲ4(B)轉染MDA-MB-231細胞后CXCＲ4、CXCL12及MMP-2蛋白的表達及MMP-2mＲNA的相對表達量。結果顯示:轉染CXCＲ4-siＲNA后CXCＲ4的mＲNA表達量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表達量顯著高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表達量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01);轉染pcDNA3.1-CXCＲ4后CXCＲ4的mＲNA表達量顯著高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表達量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表達量顯著高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01，圖2～4)。2．3劃痕實驗檢測分別轉染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231細胞遷移能力的變化沿6孔板的直徑均勻用力劃痕后，轉染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4，檢測干擾CX-CＲ4基因的表達對MDA-MB-231細胞遷移能力的影響。從倒置顯微鏡中細胞劃痕的圖像可見，在轉染CXCＲ4-siＲNA72h后與空白對照組和陰性對照組相比，實驗組細胞間距寬于對照組，愈合距離比大于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，提示轉染CXCＲ4-siＲNA后細胞的遷移能力下降，劃痕愈合遲緩，下調CXCＲ4基因的表達可抑制腫瘤細胞的遷移;在轉染pcDNA3.1-CXCＲ472h后與空白對照組和陰性對照組相比，實驗組細胞間距窄于對照圖2ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細胞中CXCＲ4mＲNA水平表達A．轉染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01圖3ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細胞中CXCL12mＲNA水平表達A．轉染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01臨床與實驗病理學雜志JClinExpPathol2017Nov;33(11)·1205·
組，愈合距離比小于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01，圖5)，提示轉染pcDNA3.1-CXCＲ4后細胞的遷移能力增強，劃痕愈合加快，上調CXCＲ4基因的表達可促進腫瘤細胞的遷移。圖4ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細胞中MMP-2mＲNA水平表A．轉染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01圖5細胞劃痕實驗檢測CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4轉染MDA-MB-231后細胞遷移能力變化2．4MTT實驗檢測分別轉染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231細胞增殖能力的變化應用MTT法檢測各組細胞的增殖能力，結果顯示:CXCＲ4-siＲNA轉染MDA-MB-231細胞48、72、96h后，實驗組細胞增殖能力較陰性對照組和空白對照組降低，其中以72h降低最為顯著，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);陰性對照組和空白對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，提示下調CXCＲ4的表達能夠顯著抑制MDA-MB-231細胞的增殖能力。pcDNA3.1-CXCＲ4轉染MDA-MB-231細胞48、72、96h后，實驗組細胞增殖能力與陰性對照組和空白對照組相比顯著增加，其中以72h降低最為顯著，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);陰性對照組與空白對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05，圖6)。提示下調CXCＲ4的表達能夠顯著促進MDA-MB-231細胞的增殖能力。圖6MTT實驗檢測轉染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后細胞增殖能力的變化3討論乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，WHO(2014)乳腺腫瘤分類的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示乳腺癌占女性腫瘤的16%，每年約50萬以上的患者死亡。其中三陰型乳腺癌占浸潤性乳腺癌的15%～20%，具有侵襲性強、病理分級高和廣泛的淋巴結轉移，且在年輕患者中更為常見［3］。與其他亞型的乳腺癌相比，三陰型乳腺癌患者在治療2～3年后發(fā)生遠處轉移和早期復發(fā)的可能性較高，患者
本文編號：3140258
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