目的探討CXCL12/CXCR4/MMP-2信號通路對三陰型乳腺癌增殖和遷移等生物學(xué)行為的影響。方法通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的瞬時轉(zhuǎn)染CXCR4-siRNA和pc DNA3.1-CXCR4,提取MDA-MB-231細(xì)胞中RNA和蛋白質(zhì),分別用RT-PCR和Western blot法檢測各組細(xì)胞中CXCR4、CXCL12及MMP-2的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)變化,應(yīng)用MTT實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移能力的改變。結(jié)果轉(zhuǎn)染CXCR4-siRNA后實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中CXCR4 mRNA及蛋白表達(dá)減少（P<0.01）,CXCL12mRNA及蛋白表達(dá)增加（P<0.01）,MMP-2 mRNA及蛋白表達(dá)減少（P<0.01）;MTT實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后72 h細(xì)胞的增殖能力下降,劃痕愈合遲緩;轉(zhuǎn)染pc DNA3.1-CXCR4后實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中CXCR4 mRNA及蛋白表達(dá)上調(diào)（P<0.01）,CXCL12 mRNA及蛋白表達(dá)降低（P<0.01）,MMP-2 mRNA及蛋白表達(dá)增加（P<0.01）,MTT實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后72h細(xì)胞的增殖能力增加,劃痕... 

【文章來源】：臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2017,33(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細(xì)胞中CXCＲ4mＲNA水平表達(dá)A．轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01

圖1Westernblot檢測CXCＲ4-siＲNA(A)和pcDNA3.1-CXCＲ4(B)轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞后CXCＲ4、CXCL12及MMP-2蛋白的表達(dá)及MMP-2mＲNA的相對表達(dá)量。結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA后CXCＲ4的mＲNA表達(dá)量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表達(dá)量顯著高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表達(dá)量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01);轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CXCＲ4后CXCＲ4的mＲNA表達(dá)量顯著高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，CXCL12的mＲNA表達(dá)量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01)，MMP-2的mＲNA表達(dá)量顯著高于空白對照組和陰性對照組(P＜0.01，圖2～4)。2．3劃痕實(shí)驗(yàn)檢測分別轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231細(xì)胞遷移能力的變化沿6孔板的直徑均勻用力劃痕后，轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4，檢測干擾CX-CＲ4基因的表達(dá)對MDA-MB-231細(xì)胞遷移能力的影響。從倒置顯微鏡中細(xì)胞劃痕的圖像可見，在轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA72h后與空白對照組和陰性對照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞間距寬于對照組，愈合距離比大于對照組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，提示轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA后細(xì)胞的遷移能力下降，劃痕愈合遲緩，下調(diào)CXCＲ4基因的表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞的遷移;在轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CXCＲ472h后與空白對照組和陰性對照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞間距窄于對照圖2ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細(xì)胞中CXCＲ4mＲNA水平表達(dá)A．轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01圖3ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細(xì)胞中CXCL12mＲNA水平表達(dá)A．轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志JClinExpPathol2017Nov;33(11)·1205·

組，愈合距離比小于對照組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01，圖5)，提示轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CXCＲ4后細(xì)胞的遷移能力增強(qiáng)，劃痕愈合加快，上調(diào)CXCＲ4基因的表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移。圖4ＲT-PCＲ檢測各組MDA-MB-231細(xì)胞中MMP-2mＲNA水平表A．轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA組;B．轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CXCＲ4組;＊＊P＜0.01圖5細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4轉(zhuǎn)染MDA-MB-231后細(xì)胞遷移能力變化2．4MTT實(shí)驗(yàn)檢測分別轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后MDA-MB-231細(xì)胞增殖能力的變化應(yīng)用MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖能力，結(jié)果顯示:CXCＲ4-siＲNA轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞48、72、96h后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能力較陰性對照組和空白對照組降低，其中以72h降低最為顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);陰性對照組和空白對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，提示下調(diào)CXCＲ4的表達(dá)能夠顯著抑制MDA-MB-231細(xì)胞的增殖能力。pcDNA3.1-CXCＲ4轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞48、72、96h后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖能力與陰性對照組和空白對照組相比顯著增加，其中以72h降低最為顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);陰性對照組與空白對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05，圖6)。提示下調(diào)CXCＲ4的表達(dá)能夠顯著促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞的增殖能力。圖6MTT實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染CXCＲ4-siＲNA和pcDNA3.1-CXCＲ4后細(xì)胞增殖能力的變化3討論乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，WHO(2014)乳腺腫瘤分類的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示乳腺癌占女性腫瘤的16%，每年約50萬以上的患者死亡。其中三陰型乳腺癌占浸潤性乳腺癌的15%～20%，具有侵襲性強(qiáng)、病理分級高和廣泛的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且在年輕患者中更為常見［3］。與其他亞型的乳腺癌相比，三陰型乳腺癌患者在治療2～3年后發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和早期復(fù)發(fā)的可能性較高，患者


本文編號：3140258