目的:1.確認(rèn)外泌體是否會促進(jìn)燙傷創(chuàng)面的愈合。2.初步探討外泌體促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合的相關(guān)機(jī)制。方法:1.采用試劑盒法分離外泌體,并通過免疫印跡法檢測外泌體標(biāo)志蛋白,透射電鏡觀察外泌體形態(tài)及納米顆粒跟蹤分析儀測定外泌體粒徑。2.選取NIH小鼠建立皮膚深二度燙傷模型,通過HE染色判斷造模是否成功。3.燙傷皮膚皮下注射血清外泌體,定期測量各組小鼠燙傷區(qū)域面積,評估外泌體的療效。4.取燙傷部位皮膚進(jìn)行HE染色,觀察皮膚組織的病理變化。5.熒光標(biāo)記法觀察外泌體能否進(jìn)入皮膚組織細(xì)胞。6.MTT法檢測血清外泌體對成纖維細(xì)胞增殖的影響。7.流式細(xì)胞術(shù)檢測血清外泌體對表皮細(xì)胞凋亡的影響。8.細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測血清外泌體對表皮細(xì)胞遷移的影響。9.蛋白免疫印跡檢測燙傷組,正常組和外泌體組皮膚的AKT磷酸化水平。10.細(xì)胞免疫熒光檢測血清外泌體對血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的影響。11.實(shí)時熒光定量PCR（RT-q PCR）檢測血清外泌體對VEGF m RNA的影響。結(jié)果:1.試劑盒法分離的的大鼠血清外泌體均表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白:CD63,HSP70;粒徑均一性良好,均127nm左右,呈雙層膜結(jié)果。2.成功建立小鼠深二度皮... 

【文章來源】：廣東藥科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

VEGF通過P13K/AKT通路介導(dǎo)血管生成示意圖

圖 3.1 大鼠血清外泌體電鏡3.1.2 血清外泌體粒徑檢測結(jié)果納米顆粒跟蹤分析技術(shù)（簡稱：NTA），是之一，常被用來檢測外泌體的粒徑。使用 NTA體的粒徑大小，如圖 3.2 所示，無論是差速超速鼠血清外泌體，粒徑出峰值都在 127nm 左右,且果顯示試劑盒法提取的血清外泌體粒徑符合外

圖 3.1 大鼠血清外泌體電鏡下形態(tài)學(xué)結(jié)果3.1.2 血清外泌體粒徑檢測結(jié)果納米顆粒跟蹤分析技術(shù)（簡稱：NTA），是近年來新興之一，常被用來檢測外泌體的粒徑。使用 NTA 分析試劑盒體的粒徑大小，如圖 3.2 所示，無論是差速超速離心法還是鼠血清外泌體，粒徑出峰值都在 127nm 左右,且峰形尖銳，果顯示試劑盒法提取的血清外泌體粒徑符合外泌體的定義標(biāo)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]間充質(zhì)干細(xì)胞來源的Exosome對神經(jīng)損傷的保護(hù)作用[J]. 魏俊吉,陳云飛,薛春玲,馬百濤,沈雅梅,關(guān)健,包新杰,吳昊,韓欽,王任直,趙春華.  中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào). 2016(01)



本文編號：3127241