目的:骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是最常見的慢性和進行性關(guān)節(jié)疾病,以軟骨變性和軟骨細胞死亡為主要特征。OA的發(fā)病機制非常復(fù)雜,迄今為止尚無有效的治療方法。研究發(fā)現(xiàn),OA患者的軟骨組織中miR-145表達水平的顯著下調(diào),人軟骨細胞C20A4中的miR-145表達與自噬活性呈相關(guān)性。本實驗通過收集原發(fā)性膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)軟骨標本及膝關(guān)節(jié)滑液,利用細胞培養(yǎng)技術(shù)、定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)、免疫印跡技術(shù)、熒光素酶測定技術(shù),檢測關(guān)節(jié)軟骨中的miR-145動態(tài)表達及其對自噬的調(diào)節(jié)作用。方法:收集40例原發(fā)性膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)液標本,進行軟骨細胞的原代培養(yǎng),通過病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)、定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)、免疫印跡技術(shù)、細胞活力檢測技術(shù)研究miR-145、自噬活性標志物L(fēng)C3-I、LC3-II、p62的表達與關(guān)節(jié)軟骨細胞自噬活性之間的關(guān)系。研究調(diào)節(jié)miR-145表達對氧化應(yīng)激狀態(tài)下自噬和軟骨細胞活力的影響,探索OA中的miR-145動態(tài)表達及其對自噬的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果:1.骨關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)軟骨、關(guān)節(jié)液和原代軟骨細胞中的miR-145與正常對照組相比,OA組的mi... 

【文章來源】：濟寧醫(yī)學(xué)院山東省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

miR-145表達在OA軟骨（A）、關(guān)節(jié)滑液（B）和原代軟骨細胞（C）與正常對照組的比較

MiR-145正性調(diào)節(jié)軟骨細胞的自噬活性

濟寧醫(yī)學(xué)院碩士專業(yè)學(xué)位論文26圖3MiR-145通過促進自噬提高氧化應(yīng)激狀態(tài)下軟骨細胞的生存能力。在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，miR-145過表達增強了軟骨細胞的生存能力，與雷帕霉素刺激自噬的作用程度相似。抑制miR-145后，與自噬抑制劑3MA處理相比，軟骨細胞的活力顯著下降。在3MA抑制自噬和miR-145過表達或雷帕霉素刺激自噬和miR-145抑制的聯(lián)合作用下，軟骨細胞活力與未處理對照組保持相同水平，表明miR-145對自噬有正向調(diào)節(jié)作用，從而提高軟骨細胞抗氧化應(yīng)激的能力。數(shù)據(jù)均值±標準誤(n=3)*p<0.05,**p<0.01,***p<0.0014MiR-145直接靶向FRS2的3′UTR通過生物信息學(xué)軟件（www.targetscan.org），預(yù)測miR-145靶向成纖維細胞生長因子受體底物2（FRS2），推定其種子序列位于3′UTR中（圖4A）。當軟骨細胞中miR-145和FRS23′UTR載體共轉(zhuǎn)染時，熒光素酶測定顯示熒光素酶活性顯著降低。相比之下，F(xiàn)RS23′UTR中的miR-145結(jié)合位點序列發(fā)生突變時，共轉(zhuǎn)染的miR-145不會影響熒光素酶活性，這表明miR-145與種子序列直接結(jié)合并靶向作用于FRS23′UTR（圖4B）。此外，與正常對照組相比，OA患者的關(guān)節(jié)軟骨和OA軟骨細胞顯示FRS2表達上調(diào)，這與其上游調(diào)控物miR-145

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3123740