背景及目的:骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種高發(fā)的關(guān)節(jié)退行性疾病,發(fā)生率高、極易致殘,且呈年輕化趨勢(shì)。目前有關(guān)其發(fā)生的機(jī)制至今仍不清楚,尚未有有效的治療方法。研究表明,關(guān)節(jié)軟骨暴露于異常滲透壓的狀態(tài)下可促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)的破壞及OA的形成。其中,滲透壓誘導(dǎo)因子（Nuclear factor of activated T cells,NFAT5）在此過(guò)程中起重要的調(diào)節(jié)作用。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn),zinc-ZIP8-MTF1介導(dǎo)的分解代謝途徑參與關(guān)節(jié)軟骨胞外基質(zhì)的破壞及OA形成的調(diào)節(jié)。由此,本文以大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞為研究對(duì)象,模擬膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞所處的滲透壓范圍,探討NFAT5與zinc-ZIP8-MTF1信號(hào)通路之間的關(guān)系及其在骨關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:采用免疫熒光和甲苯胺藍(lán)染色來(lái)鑒定體外分離的軟骨細(xì)胞;在體外用NaCl配置不同梯度的培養(yǎng)液（300mosmol/Kg-500mosmol/Kg）構(gòu)建高滲細(xì)胞培養(yǎng)模型,模擬關(guān)節(jié)腔的高滲微環(huán)境。通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法測(cè)定不同滲透壓對(duì)軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)和形態(tài)的影響。利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR和Western Blot等方法檢測(cè)NFAT5、Zr... 

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骨關(guān)節(jié)炎病理學(xué)改變[6]

圖1.2 zinc-ZIP8-MTF1信號(hào)通路在骨關(guān)節(jié)炎中的作用[11]Fig.1.2 zinc-ZIP8-MTF1 axis in osteoarthritis (OA)節(jié)炎（OA）是所有關(guān)節(jié)病中最常見(jiàn)的并且是導(dǎo)致殘疾的主要原因。未開(kāi)發(fā)出有效的用于OA的疾病緩解療法。OA以軟骨退變，滑膜炎癥軟骨下骨硬化為主要特征[73, 74]。OA發(fā)病機(jī)制是由合成代謝因子和分間的不平衡引起的，包括增加基質(zhì)降解酶，如MMPs的產(chǎn)生和ADA促進(jìn)軟骨細(xì)胞的細(xì)胞外基質(zhì)的降解，致使軟骨細(xì)胞凋亡[12-14]，軟骨基質(zhì)降解酶中，MMP3，MMP13和ADAMTS5在OA軟骨破壞中發(fā)揮研究證明，zinc-ZIP8-MTF1是實(shí)驗(yàn)性小鼠OA的一種發(fā)病機(jī)制[75]。Zn2+）涉及酶，核酸和蛋白質(zhì)的合成過(guò)程，是體內(nèi)必須的微量元素作為基質(zhì)降解酶的結(jié)構(gòu)成分，通過(guò)提供結(jié)構(gòu)支架，例如以鋅指和鋅簇個(gè)通過(guò)提供多種蛋白質(zhì)的活化劑或共激活劑[77]。有文獻(xiàn)指出Zn2+是的關(guān)鍵因子[77]。事實(shí)上，Zn2+穩(wěn)態(tài)的失衡與胚胎發(fā)育，免疫功能障疾病問(wèn)題，并增加死亡率和疾病[78]。Zn2+穩(wěn)態(tài)主要受膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

P0P4圖 2.1 軟骨細(xì)胞的形態(tài)特征（標(biāo)尺：500 μm）Fig.2.1 Mophological characteristic of articular chondrocytes（Scale bar: 500 μm）2.4.2 II 型膠原免疫熒光染色鑒定II 型膠原作為軟骨細(xì)胞的一種標(biāo)記蛋白，可以用來(lái)鑒定軟骨細(xì)胞。通過(guò)免疫熒光技術(shù)對(duì) P1 細(xì)胞進(jìn)行染色鑒定[93]。綠色熒光來(lái)確定標(biāo)記蛋白，藍(lán)色熒光來(lái)確定細(xì)胞核。在倒置顯微鏡下可以觀察到如圖 2.2 所示。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]軟骨組織工程軟骨細(xì)胞分離方式的優(yōu)化[J]. 邵博,占瓊,龔忠誠(chéng),寧曉婷,楊萌,王玥,胡鑫,高蕓竹,林兆全.  新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(09)
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碩士論文
[1]碳酸酐酶1在關(guān)節(jié)炎異常鈣化機(jī)制中的研究[D]. 鄭亞冰.濟(jì)南大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3117375