研究背景:椎間盤退變性疾病（Disc Degeneration Disease, DDD）已被公認(rèn)為腰痛的主要原因。越來越多的研究證明,椎間盤退變與多種促炎細(xì)胞因子及其代謝產(chǎn)物有關(guān)。近年來,大量研究證明,MicroRNA （miRNA）在包括退行性椎間盤疾病在內(nèi)的大多數(shù)疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。目前研究表明,椎間盤退變和炎癥因子之間存在密切聯(lián)系,但是在炎性通路的角度上分析兩者相關(guān)性的研究較少,椎間盤退變和炎癥因子之間具體的作用過程也不明確。雖然我們了解兩者之間存在相關(guān)性,但仍未找到靶基因來減輕椎間盤細(xì)胞炎癥反應(yīng),所以大部分此類研究應(yīng)用性不強,缺乏實際意義。MicroRNA-146a作為一種短小的非編碼RNA,是一種反調(diào)控因子,通過對基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)參與許多生物學(xué)過程,尤其是在炎癥反應(yīng)中扮演了重要的角色�；谝陨涎芯砍晒�,本研究擬通過體內(nèi)和體外實驗,從分子水平來研究探討MicroRNA-146a在椎間盤退變疾病中的調(diào)控機制,尋找MicroRNA-146a與TRAF6/NF-K B信號通路交互作用功能分子,為脊椎退變性病變尋找新的治療靶標(biāo)。本研究提出MicroRNA-146a過表達(dá)可... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１三組研究對象的ＮＦ－ｋ?Ｂ、ＴＮＦ－ａ和ＩＬ－１表達(dá)水平比較（ｘ?）?（ｍｇ／Ｌ）??

１９?０?２?０?０?２?１０?２２?０?２３０?２?４?０?２５０?：??ＡＣＡＣＣＧＧＣＡＧＧ?／ｖ／ＣＡＣＣＡ?ＡＧ，、ＡＧＴＴ?�。茫粒裕�?丁?ＣＧ?ＡＧｉＶＴＸＳ?Ａ／５ＣＴＴＣ?丁?ＴＧＣＴＴＧｒｒ＾ｒＣＣｒＴＧ?丁丁?ＴＴＴＧＡＡ?丁?ＴＣ：?Ｃ５Ｃ??圖１：重組質(zhì)粒測序結(jié)果??將攜帶增強型綠色焚光蛋白（Ｅｎｈａｎｃｅｄ?Ｇｒｅｅｎ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?Ｐｒｏｔｅｉｎ，?ＥＧＦＰ）告基因的載體ＭｉｃｒｏＲＮＡ－１４６ａｍｉｍｉｃ包裝成為載體顆粒，在感染細(xì)胞后表達(dá)ＥＧＦＰ，??在顯微鏡下發(fā)綠色熒光。然后進(jìn)行預(yù)實驗條件篩查顯示，在６孔板中每孔的細(xì)胞??數(shù)為１Ｘ１０５個，細(xì)胞融合度在轉(zhuǎn)染時可以達(dá)到３０％？５０％，而在感染復(fù)數(shù)??（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ?ｏｆ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，?ＭＯＩ）?＝５０，ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ?５ｕｇ／ｍＬ?時有較高感染效??＇

將線性化Ｍｉｃ：ｒｏＲＮＡ－１４６ａ?ｍｉｍｉｃ載體與合成的ＤＮＡ?ｏｌｉｇｏ經(jīng)過連接轉(zhuǎn)化，然??后將含有ＮＰ－ｓｉＲＮＡ序列的重組質(zhì)粒抽取出來經(jīng)過測序，結(jié)果顯示其完全符合我??們的實驗設(shè)計要求，如圖１。??１９?０?２?０?０?２?１０?２２?０?２３０?２?４?０?２５０?：??ＡＣＡＣＣＧＧＣＡＧＧ?／ｖ／ＣＡＣＣＡ?ＡＧ，、ＡＧＴＴ?�。茫粒裕�?丁?ＣＧ?ＡＧｉＶＴＸＳ?Ａ／５ＣＴＴＣ?丁?ＴＧＣＴＴＧｒｒ＾ｒＣＣｒＴＧ?丁丁?ＴＴＴＧＡＡ?丁?ＴＣ：?Ｃ５Ｃ??圖１：重組質(zhì)粒測序結(jié)果??將攜帶增強型綠色焚光蛋白（Ｅｎｈａｎｃｅｄ?Ｇｒｅｅｎ?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?Ｐｒｏｔｅｉｎ，?ＥＧＦＰ）報??告基因的載體ＭｉｃｒｏＲＮＡ－１４６ａｍｉｍｉｃ包裝成為載體顆粒，在感染細(xì)胞后表達(dá)ＥＧＦＰ，??在顯微鏡下發(fā)綠色熒光。然后進(jìn)行預(yù)實驗條件篩查顯示，在６孔板中每孔的細(xì)胞??數(shù)為１Ｘ１０５個，細(xì)胞融合度在轉(zhuǎn)染時可以達(dá)到３０％？５０％，而在感染復(fù)數(shù)??（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ?ｏｆ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，?ＭＯＩ）?＝５０，ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ?５ｕｇ／ｍＬ?時有較高感染效??＇Ｉ?ｔ??圖２：?ＭｉｃｒｏＲＮＡ－１４６ａ組感染細(xì)胞后倒置熒光顯微鏡圖像??４２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]miR-146a通過TRAF6調(diào)控中樞內(nèi)源性IFN-β參與實驗性自身免疫性腦脊髓炎病程發(fā)生發(fā)展的機制研究[D]. 王戩萌.吉林大學(xué) 2016



本文編號：3116002