發(fā)布時(shí)間：2021-03-30 13:33

　　目的:探究大鼠肌腱干細(xì)胞（tendon-derived stem cells,TDSCs）體外成神經(jīng)分化的潛能,并研究Notch通路在此成神經(jīng)分化過程中的調(diào)控作用及其機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)組將4周齡SD大鼠的跟腱組織取出,分離并提取肌腱干細(xì)胞（tendon-derived stem cells,TDSCs）進(jìn)行培養(yǎng),將細(xì)胞培養(yǎng)到第3代（P3）后分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組不做任何處理繼續(xù)予以普通培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組采用誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基進(jìn)行成神經(jīng)細(xì)胞分化的誘導(dǎo),在誘導(dǎo)相應(yīng)的時(shí)間段后使用定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)基因GFAP、Neun、β3-tubulin表達(dá)變化,找出誘導(dǎo)的合適時(shí)間后,進(jìn)一步使用蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）和免疫熒光技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)基因GFAP、Neun、β3-tubulin表達(dá)變化,并檢測(cè)Notch通路相關(guān)基因NICD、Hes-1、RBPJk的表達(dá)差異,研究Notch通路在此成神經(jīng)分化過程中表達(dá)的變化,之后進(jìn)一步對(duì)Notch通路進(jìn)行調(diào)控后再檢測(cè)TDSCs成神經(jīng)分化的能力變化。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用t檢驗(yàn)驗(yàn)證統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果:與對(duì)照組... 

【文章來源】：東南大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

正常TDSCs與神經(jīng)分化誘導(dǎo)7d之后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察:（A、B×40）A：正常TDSCsB:TDSCs誘導(dǎo)7d后的TDSCs

討論13圖2.TDSCs分化成神經(jīng)分化6h，12h，1d，2d，3d，5d，7d，9d時(shí)gfap、β3-tubulin與Neun基因RNA的表達(dá)差異變化Figure2.6h,12h,1d,2d,3d,5d,7dand9dafterneuraldifferentiation,expressionofgfap,β3-tubulinandNeunRNAinTDSCs2．誘導(dǎo)分化之后的肌腱干細(xì)胞高表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞特異性標(biāo)記物2.1TDSCs經(jīng)誘導(dǎo)分化后7d，與正常培養(yǎng)相同天數(shù)的肌腱干細(xì)胞比較神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)特異性基因的表達(dá)。經(jīng)誘導(dǎo)分化之后的TDSCs在gfap、β3-tubulin與Neun基因mRNA的表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖3A）。WB同樣檢測(cè)到上述基因在分化誘導(dǎo)之后的TDSCs中高表達(dá)（圖3B），并且對(duì)目的條帶灰度值進(jìn)行分析，同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖3C）。圖3.正常TDSCs與TDSCs神經(jīng)分化誘導(dǎo)7d之后細(xì)胞在神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)性基因gfap、β3-tubulin和Neun的表達(dá)差異:（TDSCs：普通肌腱干細(xì)胞ND-TDSCs：普通肌腱干細(xì)胞經(jīng)過神經(jīng)誘導(dǎo)7d后）A:RT-PCR測(cè)兩組mRNA表達(dá)差異;B:WB測(cè)兩組蛋白表達(dá)差異;C:WB目的條帶灰度值分析Figure3.Differencesinexpressionofneuronalcellgenesgfap,β3-tubulin,andNeunbetweennormalTDSCsand7dafterneuronaldifferentiation:(TDSCs:normaltendonstemcellsND-TDSCs:normaltendonstemcellsafterneuronaldifferentiationfor7days)A:RT-PCRwasusedtodetectthedifferenceinmRNAexpressionbetweenthetwogroups.B:WBwasusedtomeasurethedifferenceinproteinexpressionbetweenthetwogroups.C:GrayvalueanalysisofWB.

討論15圖4.免疫熒光染色檢測(cè)正常TDSCs與TDSCs神經(jīng)分化誘導(dǎo)7d之后細(xì)胞在gfap、β3-tubulin和Neun的陽性細(xì)胞數(shù)量和表達(dá)量的差異:（TDSCs：普通肌腱干細(xì)胞;ND-TDSCs：普通肌腱干細(xì)胞經(jīng)過神經(jīng)誘導(dǎo)7d后）Figure4.Immunofluorescencewasusedtomeasurethedifferencesinexpressionofneuronalcellgenesgfap,β3-tubulin,andNeunbetweennormalTDSCsand7dafterneuronaldifferentiation:(TDSCs:normaltendonstemcells.ND-TDSCs:normaltendonstemcellsafterneuronaldifferentiationfor7days)3.Notch通路在肌腱干細(xì)胞成神經(jīng)分化中的表達(dá)變化TDSCs經(jīng)誘導(dǎo)分化后7d，與正常培養(yǎng)相同天數(shù)的肌腱干細(xì)胞比較神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)特異性基因的表達(dá)。經(jīng)誘導(dǎo)分化之后的TDSCs在NICD、Hes-1與RBPJk基因mRNA的表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖5A)。WB同樣檢測(cè)到上述標(biāo)記物在分化誘導(dǎo)之后的TDSCs中的表達(dá)降低（圖5B）。并且對(duì)目的條帶灰度值進(jìn)行分析，同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖5C）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肌腱干細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)髕腱愈合的對(duì)比研究[J]. 孔祥朋,倪明,張國強(qiáng),柴偉,李想,李於聰,王巖.  浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016 (02)
[2]慢性腱病治療的新策略:調(diào)控肌腱干細(xì)胞成肌腱分化促進(jìn)肌腱愈合[J]. 林禹丞,王宸,芮云峰.  中國矯形外科雜志. 2013(21)
[3]Wnt3a signaling promotes proliferation,myogenic differentiation,and migration of rat bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Yan-chang SHANG~(2,3),Shu-hui WANG~4,Fu XIONG~5,Cui-ping ZHAO~2,Fu-ning PENG~2,Shan-wei FENG~2,Mei-shan LI~2,YongLI~5,Cheng ZHANG~(2,5,6)~2 Department of Neurology First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510080,China,~3 Department of Geriatric NeurologyChinese People’s Liberation Army General Hospital,Beijing 100853,China;~4 Department of Neurology,Beijing Friendship Hospital,CapitalMedical University,Beijing 100050,China,~5 Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering,Sun Yat-sen University Guangzhou510080.China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2007(11)



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