研究背景瘢痕形成是創(chuàng)面修復(fù)過程中難以避免也十分棘手的問題,深度燒傷等嚴(yán)重皮膚損傷后均會(huì)有不同程度的瘢痕形成,這嚴(yán)重影響了傷處的外觀及后期功能活動(dòng)。增生性瘢痕的防治是臨床研究的重要方向,但直到現(xiàn)在,增生性瘢痕的發(fā)生發(fā)展機(jī)制仍不十分清楚,導(dǎo)致其治療效果十分有限。研究發(fā)現(xiàn),成纖維細(xì)胞是參與創(chuàng)面修復(fù)的主要功能細(xì)胞之一,它通過分泌過多的細(xì)胞外基質(zhì)（extracellμLar cell matrix,ECM）和過度增殖而在增生性瘢痕發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。TGF-β1是組織纖維化過程中十分關(guān)鍵的因子,大量研究表明TGF-β1及其下游靶分子通過影響細(xì)胞增殖、凋亡、分化、自噬和局部免疫反應(yīng)來影響組織纖維化。在組織修復(fù)的早期,增生性瘢痕組織會(huì)高表達(dá)TGF-β1從而促進(jìn)真皮成纖維細(xì)胞的增殖及遷移,這與瘢痕的產(chǎn)生密切相關(guān)。我們課題組前期研究發(fā)現(xiàn),在皮膚真皮成纖維細(xì)胞中TGF-β1可以促進(jìn)P311基因的表達(dá),而P311在組織纖維化、成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化中均發(fā)揮重要的作用,除此以外,P311還參與神經(jīng)再生、腫瘤侵襲、血壓穩(wěn)態(tài)維持、血管再生、肺泡發(fā)生等重要病理生理學(xué)過程。但纖維化過程中P311上游調(diào)控機(jī)... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【圖文】：

成人包皮原代真皮成纖維細(xì)胞中P311基因promoter-1序列的表觀學(xué)修飾情況

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文29圖3.成人包皮原代真皮成纖維細(xì)胞中P311基因promoter-2序列的表觀學(xué)修飾情況2.3.2啟動(dòng)子質(zhì)粒的構(gòu)建根據(jù)上一部分的數(shù)據(jù)分析結(jié)果，我們認(rèn)為promoter-1更有可能是P311基因的啟動(dòng)，但是我們需要進(jìn)一步通過生物學(xué)實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證這一推測。因此，我們需要構(gòu)建包含P311啟動(dòng)子片段的pGL3-Basic質(zhì)粒，利用雙熒光素酶和質(zhì)粒截短的方式進(jìn)一步驗(yàn)證。因此我們的設(shè)計(jì)了不同長度大小的啟動(dòng)子片段，通過鑒定含有不同片段的pGL3-Basic質(zhì)粒的的熒光素酶活性來找出真正的啟動(dòng)子區(qū)（圖4）。首先我們通過PCR擴(kuò)增目的片段并進(jìn)行DNA凝膠電泳對片段大小進(jìn)行驗(yàn)證，獲得了不同片段大小的pGL3-Basic質(zhì)粒（圖5）。圖4.P311基因結(jié)構(gòu)示意圖

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文29圖3.成人包皮原代真皮成纖維細(xì)胞中P311基因promoter-2序列的表觀學(xué)修飾情況2.3.2啟動(dòng)子質(zhì)粒的構(gòu)建根據(jù)上一部分的數(shù)據(jù)分析結(jié)果，我們認(rèn)為promoter-1更有可能是P311基因的啟動(dòng)，但是我們需要進(jìn)一步通過生物學(xué)實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證這一推測。因此，我們需要構(gòu)建包含P311啟動(dòng)子片段的pGL3-Basic質(zhì)粒，利用雙熒光素酶和質(zhì)粒截短的方式進(jìn)一步驗(yàn)證。因此我們的設(shè)計(jì)了不同長度大小的啟動(dòng)子片段，通過鑒定含有不同片段的pGL3-Basic質(zhì)粒的的熒光素酶活性來找出真正的啟動(dòng)子區(qū)（圖4）。首先我們通過PCR擴(kuò)增目的片段并進(jìn)行DNA凝膠電泳對片段大小進(jìn)行驗(yàn)證，獲得了不同片段大小的pGL3-Basic質(zhì)粒（圖5）。圖4.P311基因結(jié)構(gòu)示意圖


本文編號(hào)：3100595