第一部分兔早期退變椎間盤來源NPSCs分離、培養(yǎng)和鑒定目的分離、培養(yǎng)和鑒定兔早期退變椎間盤髓核來源干細(xì)胞（NPSCs）。方法1)選取健康新西蘭大白兔,通過針刺法誘導(dǎo)早期椎間盤退變模型。2)獲取兔健康和早期退變椎間盤髓核組織,消化后,培養(yǎng)。3)鑒定所分離細(xì)胞表面標(biāo)志物基因表達(dá)和多系分化潛能（成骨、成脂、成軟骨）。結(jié)果1)針刺法可有效誘導(dǎo)兔椎間盤退變。2)兔早期退變椎間盤內(nèi)髓核組織消化后,體外培養(yǎng),能夠觀察到細(xì)胞貼壁,呈集落生長,原代細(xì)胞的形態(tài)多呈紡錘樣或鋪路石樣;細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,可見細(xì)胞形態(tài)變?yōu)榫坏匿伮肥瘶印?)所分離、培養(yǎng)P2代NPSCs表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）陽性標(biāo)志物基因（CD166,CD44,CD29,不表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)志物基因（CD14,CD8,CD4）;經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)后,NPSCs可成骨、成脂、成軟骨多系分化;同正常髓核組織中分離的NPSCs相比,早期退變椎間盤來源的NPSCs集落形成較少。結(jié)論兔早期退變椎間盤髓核組織可分離出呈集落樣生長,表達(dá)MSCs陽性標(biāo)志物,且具備多系分化潛能的干細(xì)胞（NPSCs）;同健康椎間盤來源NPSCs相比,早期退變椎間盤來源NPSCs集落形... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

NPSCs分離和培養(yǎng)A.正常兔椎間盤MRIT2成像，可見椎間盤成較強(qiáng)信號（紅色箭頭所示）

圖 2 NPSCs（健康和退變組織來源）表達(dá) MSCs 表面標(biāo)記物基因。髓落形成細(xì)胞均表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)基因（ CD29, CD44, CD166），不表達(dá)胞表面標(biāo)志物基因（CD14, CD8, CD4), 髓核細(xì)胞作為對照基本不表達(dá)胞并表明標(biāo)志物，而脾臟細(xì)胞作為陽性對照均表達(dá)上述標(biāo)志物。Fig.2 Expression of stem cell markers in NP-derived colony formNP-derived colony forming cells both from the early degenerated discs (and healthy discs (H-NPSCs) were positive for, but negative for CD4, CD8Spleen cells expressed all these genes as a positive control, while NP cellsnone of these genes. NP nucleus pulposus.3. NPSCs 的多向分化潛能誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)3.1 成脂誘導(dǎo)

南京醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)果1. PRP 和全血成分L-PRP 組血小板濃度為 1691.75 ± 151.89 × 109/L，P-PRP 組血小板濃度為1749.13 ± 128.35 × 109/L。全血中血小板濃度為 440.50 ± 60.18 × 109/L，其濃度約為PRP中血小板濃度三分之一（圖1a）。全血中白細(xì)胞濃度為 8.92 ± 1.03 × 109/L，L-PRP 組白細(xì)胞濃度為 22.97 ± 2.63 × 109/L，P-PRP 組白細(xì)胞濃度為 0.23 ± 0.09 ×109/L（圖 1b）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]家兔髓核間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)與鑒定[J]. 許剛,張長春,朱坤,葉雨辰,韓仲兵.  華北理工大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2018(04)
[2]正常與退變椎間盤來源髓核間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)性能比較[J]. 劉洋,王靜成,馮新民,胡樂,黃澤楠,南利平,王峰,周詩豐,張亮.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2018 (06)
[3]脊索細(xì)胞特異性標(biāo)志物研究進(jìn)展[J]. 劉卓超,孟祥超,張興凱.  國際骨科學(xué)雜志. 2016(05)
[4]正常與退變髓核的髓核間充質(zhì)干細(xì)胞代謝活性及干性基因表達(dá)的比較[J]. 陽普山,劉子雙一,陶暉,姜?jiǎng)倧?qiáng),吳劍宏,阮狄克,王德利.  中國脊柱脊髓雜志. 2014(05)
[5]椎間盤退變的生物學(xué)治療:從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用[J]. 王善正,王宸,芮云峰.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2012(17)
[6]磁性標(biāo)記脂肪干細(xì)胞修復(fù)兔退變椎間盤[J]. 陳建宇,蔣新華,蔡兆熙,張婭,劉珍珍,梁碧玲.  中國介入影像與治療學(xué). 2012(01)
[7]富含血小板血漿凝膠復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建可注射組織工程髓核[J]. 馬健,李放,任大江,吳坤,萬中元,李進(jìn)珍.  中國脊柱脊髓雜志. 2011(05)
[8]CONSTRUCTING ADENO-ASSOCIATED VIRUS-TGFβ3 AND COMPARING ITS BIOLOGICAL EFFECT ON PROTEOGLYCAN SYNTHESIS IN DEDIFFERENTIATED NUCLEUS PULPOUS CELLS WITH ADENOVIRUS-TGFβ1[J]. Jia-ming Sai1,2, You-gu Hu1, and De-chun Wang1 1Department of Orthopaedic Surgery, the Affiliated Hospital of Medical College, Qingdao University, Qingdao 266003 2Orthopaedic Laboratory, Orthopaedics and Traumatology Hospital, Qingdao 266003.  Chinese Medical Sciences Journal. 2007(02)



本文編號：3093353