乳腺癌（BrCa）是全世界范圍內(nèi)女性發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。盡管系統(tǒng)性的治療方法已經(jīng)降低了乳腺癌死亡率,但仍然伴隨著很高的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此,探索乳腺癌發(fā)展的分子機(jī)制將有助于對其的診斷和治療。在本研究中我們發(fā)現(xiàn),小鼠乳腺導(dǎo)管條件性敲除癌高甲基化基因1（HIC1）能夠促進(jìn)腫瘤形成初期的惡性轉(zhuǎn)化。同時共培養(yǎng)實驗揭示了HIC1缺失的乳腺癌細(xì)胞能夠誘導(dǎo)微環(huán)境中乳腺成纖維細(xì)胞的活化。進(jìn)一步,通過RT-qPCR,ELISA,Luciferase以及ChIP實驗,我們發(fā)現(xiàn)趨化因子CXCL14是HIC1直接調(diào)控的下游靶點。HIC1缺失的乳腺癌細(xì)胞能夠分泌更多的趨化因子CXCL14到腫瘤微環(huán)境中,結(jié)合位于乳腺成纖維細(xì)胞表面新的受體GPR85,活化Erk1/2,Akt和neddylation通路,從而介導(dǎo)成纖維細(xì)胞的活化。另外,通過細(xì)胞因子微陣列分析,我們發(fā)現(xiàn)被CXCL14活化的成纖維細(xì)胞能夠分泌更多的趨化因子CCL17,通過CCL17/CCR4軸誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）從而促進(jìn)乳腺癌的發(fā)展。最后,通過乳腺組織芯片分析,我們確定了HIC1-CXCL14-CCL17回路確實與乳腺癌的惡... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
全文縮略詞中英文對照
1 緒論
    1.1 腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞
    1.2 癌高甲基化基因1（HIC1）
    1.3 趨化因子CXCL14
    1.4 孤兒G蛋白偶聯(lián)受體GPR85
    1.5 趨化因子CCL17及其受體CCR4
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要儀器設(shè)備
        2.1.2 主要試劑、耗材（商品化）
        2.1.3 實驗室自配試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與凍存
        2.2.2 條件性基因敲除小鼠構(gòu)建
        2.2.3 小鼠基因型鑒定
        2.2.4 Whole-mount乳腺洋紅染色
        2.2.5 乳腺組織的油紅染色
        2.2.6 蘇木素-伊紅染色（H&E染色）
        2.2.7 免疫組織化學(xué)染色（IHC）
        2.2.8 石蠟切片的免疫熒光
        2.2.9 細(xì)胞的免疫熒光
        2.2.10 原代乳腺成纖維細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
        2.2.11 免疫印跡（Western blot）
        2.2.12 血管擬態(tài)形成
        2.2.13 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化和小抽
        2.2.14 穩(wěn)轉(zhuǎn)質(zhì)粒和細(xì)胞的構(gòu)建
        2.2.15 質(zhì)粒中抽
        2.2.16 RNA的提取
        2.2.17 逆轉(zhuǎn)錄及實時熒光定量PCR（RT-qPCR）
        2.2.18 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灒↙uciferase）
        2.2.19 基因定點突變
        2.2.20 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）
        2.2.21 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）
        2.2.22 人類蛋白質(zhì)組微陣列芯片
        2.2.23 親和素pull-down
        2.2.24 鈣內(nèi)流測定
125I標(biāo)記的配體-受體結(jié)合力測定">        2.2.25 ¹²⁵I標(biāo)記的配體-受體結(jié)合力測定
        2.2.26 腫瘤細(xì)胞與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)
        2.2.27 細(xì)胞因子微陣列芯片
        2.2.28 細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲分析
        2.2.29 siRNA轉(zhuǎn)染
        2.2.30 流式分析
        2.2.31 乳腺原位移植瘤的建立和活體成像
        2.2.32 乳腺癌組織芯片
        2.2.33 臨床數(shù)據(jù)庫分析
        2.2.34 動物和人體實驗倫理批準(zhǔn)
        2.2.35 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
3 結(jié)果
    3.1 HIC1缺失誘導(dǎo)了小鼠乳腺導(dǎo)管的增生和泌乳缺陷
    3.2 HIC1缺失的乳腺癌細(xì)胞誘導(dǎo)間質(zhì)中乳腺成纖維細(xì)胞活化
    3.3 CXCL14是HIC1直接調(diào)控的下游靶基因
    3.4 HIC1缺失的乳腺癌細(xì)胞分泌趨化因子CXCL14介導(dǎo)乳腺成纖維細(xì)胞活化
    3.5 CXCL14通過活化Erk1/2,Akt和neddylation通路誘導(dǎo)乳腺成纖維細(xì)胞活化
    3.6 GPR85是一個新的CXCL14的功能性受體
    3.7 CXCL14活化的成纖維細(xì)胞分泌趨化因子CCL17促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移
    3.8 癌相關(guān)成纖維細(xì)胞分泌CCL17促進(jìn)乳腺癌的原位肺轉(zhuǎn)移
    3.9 HIC1-CXCL14-CCL17回路與乳腺癌病人惡性發(fā)展相關(guān)
4 結(jié)論與討論
5 參考文獻(xiàn)
6 附錄
7 致謝
8 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)



本文編號：3019981