目的:瘢痕一直以來(lái)都是整形外科領(lǐng)域的一大難題。創(chuàng)傷后過(guò)度的修復(fù)會(huì)導(dǎo)致病理性瘢痕的形成,病理性瘢痕主要包括瘢痕疙瘩和增生性瘢痕。TGF-β1是傷口愈合后強(qiáng)有力的生長(zhǎng)因子,被認(rèn)為是瘢痕疙瘩和其他纖維化疾病的關(guān)鍵調(diào)控因子,TGF-β1與TGF-β受體結(jié)合后將激活信號(hào)傳導(dǎo)到細(xì)胞核內(nèi),激發(fā)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,來(lái)調(diào)控瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖過(guò)程。HTRA1是一種熱激性蛋白,屬于HTRA家族成員之一。研究發(fā)現(xiàn),HTRA1在腫瘤中具有剪切細(xì)胞內(nèi)TGF-β1前體進(jìn)而抑制TGF-β1信號(hào)通路的作用。鑒于HTRA1為T(mén)GF-β1的抑制基因,且HTRA1的異常表達(dá)與眾多腫瘤有關(guān),盡管瘢痕疙瘩沒(méi)有惡性征象,但其某些特征包括超出原有創(chuàng)傷范圍、持續(xù)性生長(zhǎng)并極易復(fù)發(fā)等又與惡性腫瘤有一定相似性。因此,本研究旨在首先明確HTRA1在瘢痕疙瘩中的表達(dá)水平、生物學(xué)功能以及潛在作用機(jī)制。然后在前期工作的基礎(chǔ)上。進(jìn)一步研究靶向HTRA1的miRNA對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。方法:在HTRA1研究階段,從組織水平,收集瘢痕疙瘩和正常皮膚組織各26例,應(yīng)用RT-PCR、western blot和免疫組化技術(shù)檢測(cè)HTRA1和... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：109 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

HTRA1和TGF-β1在瘢痕疙瘩和正常組織中表達(dá)水平

高于正常皮膚；E：免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)正常皮膚組織和瘢痕疙瘩中示 HTRA1 的表達(dá)在瘢痕疙瘩中明顯高于正常皮膚；F: 免疫組織化學(xué)染瘢痕疙瘩中 TGF-β1 表達(dá)，結(jié)果顯示 TGF-β1 的表達(dá)在瘢痕疙瘩中明顯正常皮膚；KL：Keloid）。放大倍數(shù) 200x，* P<0.05；**P<0.01。痕疙瘩中 Smad 信號(hào)通路活化水平檢測(cè)ds 通路是 TGF-β1 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中最重要的通路，Smad2 是 TGF-β信號(hào)分子，在 TGF-β1 生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮中起重要作用。因此，膚組織和瘢痕疙瘩中 Smad2 總蛋白含量以及磷酸化水平。免疫常皮膚組織和瘢痕疙瘩中均可以檢測(cè)到 Smad2 總蛋白以及磷酸織相比，瘢痕疙瘩 Smad2 總蛋白含量沒(méi)有發(fā)生明顯變化；瘢痕ad2（p-Smad2）水平顯著高于正常皮膚組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意些結(jié)果說(shuō)明，瘢痕疙瘩中 Smads 通路活化水平升高。

圖 3 活性 TGF-β1 誘導(dǎo) PAI-1 介導(dǎo)的熒光素酶基因表達(dá)報(bào)告載體的構(gòu)建示意圖；B：將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到 HEK293TTGF-β1（10ng，200ng，500ng，1μg）的細(xì)胞中測(cè)定熒光素酶基因表達(dá)強(qiáng)度，而非活性 TGF-β1 不能激活熒光素酶基因向調(diào)節(jié)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中 latent TGF-成功分離瘢痕疙瘩中成纖維細(xì)胞，并用非活性 TRA1）單獨(dú)或組合處理。24h 后，應(yīng)用 Western blot細(xì)胞中 Smad2 的磷酸化水平和上清液中活性 TGF于 rhHTRA1 或非活性 TGF-β1 的成纖維細(xì)胞中 Sm 量均明顯升高（圖 4A 和 B）。此外，rhHTRA1 和強(qiáng)成纖維細(xì)胞中 Smad2 的磷酸化水平和活性 TG


本文編號(hào)：3016042