目的:瘢痕一直以來都是整形外科領(lǐng)域的一大難題。創(chuàng)傷后過度的修復(fù)會導(dǎo)致病理性瘢痕的形成,病理性瘢痕主要包括瘢痕疙瘩和增生性瘢痕。TGF-β1是傷口愈合后強有力的生長因子,被認(rèn)為是瘢痕疙瘩和其他纖維化疾病的關(guān)鍵調(diào)控因子,TGF-β1與TGF-β受體結(jié)合后將激活信號傳導(dǎo)到細胞核內(nèi),激發(fā)多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,來調(diào)控瘢痕疙瘩成纖維細胞的增殖過程。HTRA1是一種熱激性蛋白,屬于HTRA家族成員之一。研究發(fā)現(xiàn),HTRA1在腫瘤中具有剪切細胞內(nèi)TGF-β1前體進而抑制TGF-β1信號通路的作用。鑒于HTRA1為TGF-β1的抑制基因,且HTRA1的異常表達與眾多腫瘤有關(guān),盡管瘢痕疙瘩沒有惡性征象,但其某些特征包括超出原有創(chuàng)傷范圍、持續(xù)性生長并極易復(fù)發(fā)等又與惡性腫瘤有一定相似性。因此,本研究旨在首先明確HTRA1在瘢痕疙瘩中的表達水平、生物學(xué)功能以及潛在作用機制。然后在前期工作的基礎(chǔ)上。進一步研究靶向HTRA1的miRNA對瘢痕疙瘩成纖維細胞生物學(xué)功能的影響。方法:在HTRA1研究階段,從組織水平,收集瘢痕疙瘩和正常皮膚組織各26例,應(yīng)用RT-PCR、western blot和免疫組化技術(shù)檢測HTRA1和... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

HTRA1和TGF-β1在瘢痕疙瘩和正常組織中表達水平

高于正常皮膚；E：免疫組織化學(xué)染色檢測正常皮膚組織和瘢痕疙瘩中示 HTRA1 的表達在瘢痕疙瘩中明顯高于正常皮膚；F: 免疫組織化學(xué)染瘢痕疙瘩中 TGF-β1 表達，結(jié)果顯示 TGF-β1 的表達在瘢痕疙瘩中明顯正常皮膚；KL：Keloid）。放大倍數(shù) 200x，* P<0.05；**P<0.01。痕疙瘩中 Smad 信號通路活化水平檢測ds 通路是 TGF-β1 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中最重要的通路，Smad2 是 TGF-β信號分子，在 TGF-β1 生物學(xué)效應(yīng)的發(fā)揮中起重要作用。因此，膚組織和瘢痕疙瘩中 Smad2 總蛋白含量以及磷酸化水平。免疫常皮膚組織和瘢痕疙瘩中均可以檢測到 Smad2 總蛋白以及磷酸織相比，瘢痕疙瘩 Smad2 總蛋白含量沒有發(fā)生明顯變化；瘢痕ad2（p-Smad2）水平顯著高于正常皮膚組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意些結(jié)果說明，瘢痕疙瘩中 Smads 通路活化水平升高。

圖 3 活性 TGF-β1 誘導(dǎo) PAI-1 介導(dǎo)的熒光素酶基因表達報告載體的構(gòu)建示意圖；B：將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到 HEK293TTGF-β1（10ng，200ng，500ng，1μg）的細胞中測定熒光素酶基因表達強度，而非活性 TGF-β1 不能激活熒光素酶基因向調(diào)節(jié)瘢痕疙瘩成纖維細胞中 latent TGF-成功分離瘢痕疙瘩中成纖維細胞，并用非活性 TRA1）單獨或組合處理。24h 后，應(yīng)用 Western blot細胞中 Smad2 的磷酸化水平和上清液中活性 TGF于 rhHTRA1 或非活性 TGF-β1 的成纖維細胞中 Sm 量均明顯升高（圖 4A 和 B）。此外，rhHTRA1 和強成纖維細胞中 Smad2 的磷酸化水平和活性 TG


本文編號：3016042