背景:近年來(lái),自體脂肪移植（Autologous fat graft,AFT）在整形美容外科發(fā)揮日益重要的作用,作為增加待修復(fù)區(qū)域局部軟組織體積的重要手段,現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于組織器官修復(fù)重建、豐胸、豐臀、面部脂肪填充除皺、顳部（太陽(yáng)穴）凹陷、面頰部凹陷、雙側(cè)面部不對(duì)稱(chēng),甚至是乳腺癌病人術(shù)后乳房重建及其他相關(guān)術(shù)式^[1-3],且具備生物相容性好、獲取簡(jiǎn)便、來(lái)源廣泛、填充效果好和創(chuàng)傷小等顯著優(yōu)勢(shì),是目前公認(rèn)較為安全和有效的手術(shù)方法^[4-6]。但高吸收率、低存活率等不足^[7],限制了該技術(shù)的進(jìn)一步應(yīng)用和推廣。因此脂肪移植手術(shù)的關(guān)鍵就是提高自體移植脂肪成活率。脂肪干細(xì)胞（Adipose-derived Stem Cells,ADSCs）是一種來(lái)源于脂肪組織并且具有多向分化潛能和增殖能力的間充質(zhì)干細(xì)胞。目前已有研究證實(shí),ADSCs在提高移植脂肪存活率等方面發(fā)揮著重要作用。它主要通過(guò)促進(jìn)VEGF、bFGF、MMP-9、PDGF、TGF-β等促血管生成因子的分泌,以及直接分化為新生血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管周?chē)?xì)胞,使得移植脂肪能夠在受區(qū)更快獲得... 

【文章來(lái)源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

hADSCs表面標(biāo)記物

24圖1.3鏡下ADSCsP4正常培養(yǎng)及去血清培養(yǎng)對(duì)比在去血清的情況下，ADSCs仍然保持著正常的形態(tài)及特征，培養(yǎng)液無(wú)渾濁等情況出現(xiàn)，細(xì)胞生長(zhǎng)速度放緩3.4hADSCs來(lái)源exosomes提取收集足量第四代饑餓去血清培養(yǎng)48h后的ADSCs上清液，使用最為經(jīng)典的差速離心法來(lái)提取exosomes；在最后可以得到透明膠凍樣的可見(jiàn)沉淀，即為我們獲得的hADSCs來(lái)源的exosomes沉淀；最后使用PBS多次重復(fù)沖洗離心管底及重懸沉淀后放入-80℃冰箱保存。A、B：ADSCs來(lái)源的exosomes沉淀圖1.4經(jīng)典的差速離心法獲取的細(xì)胞上清沉淀3.5ADSCs來(lái)源的exosomes電鏡檢測(cè)等體積的exosomes懸液與4%PFA混合，經(jīng)過(guò)戊二醛固定，蒸餾水沖洗后利用雙氧釉進(jìn)行負(fù)染，干燥后進(jìn)行電鏡觀察。在使用同樣體積的ADSCs培養(yǎng)上清液進(jìn)行離心后，重懸的exosomes在電鏡下可以看出經(jīng)過(guò)48h去血清饑餓培養(yǎng)所獲得的盤(pán)狀囊泡結(jié)構(gòu)的exosomes在鏡下單位視野內(nèi)含量較ADSCs正常培養(yǎng)液所能觀察到的盤(pán)狀囊泡結(jié)構(gòu)的exosomes更多，并且該盤(pán)狀囊泡的直徑多集中

25在30-150nm范圍內(nèi)。A:正常培養(yǎng)exosomes80kvB:去FBS培養(yǎng)exosomes80kV圖1.5ADSCs來(lái)源exosomes電鏡檢測(cè)經(jīng)過(guò)48h去血清饑餓培養(yǎng)所獲得的盤(pán)狀囊泡結(jié)構(gòu)的exosomes在鏡下單位視野內(nèi)含量較ADSCs正常培養(yǎng)液所能觀察到的盤(pán)狀囊泡結(jié)構(gòu)的exosomes更多，并且該盤(pán)狀囊泡的直徑多集中在30-150nm范圍內(nèi)。3.6hADSCs來(lái)源的exosomes免疫印跡試驗(yàn)（WesternBlot）將獲取的hADSCs來(lái)源的exosomes經(jīng)過(guò)裂解、定量后，計(jì)算合適的計(jì)量加入至電泳液及濃縮膠已經(jīng)配置好的上樣孔中，與Marker在同一張膠上進(jìn)行電泳，電泳完畢進(jìn)行轉(zhuǎn)膜及免疫反應(yīng)，最后通過(guò)曝光得到如下顯影。可以看到它既表達(dá)ADSCs的相應(yīng)蛋白（CD44、CD34、CD90），又表達(dá)CD63這一exosomes特異性的標(biāo)志蛋白。A:CD44B:CD34(120KD)C:CD90D:Ago2E:TSG101F:CD63G:EPCAM圖1.6ADSCs來(lái)源exosomes的WesternBlot檢測(cè)exosomes既表達(dá)ADSCs的相應(yīng)蛋白（CD44、CD34、CD90），又表達(dá)


本文編號(hào)：3007051