目的:1.目前針對骨科患者后期難愈創(chuàng)面或組織缺損,傳統(tǒng)治療方法效果差、愈合時間長,本實驗擬在找到一種來源于自體細胞或者組織的治療方式,來加快創(chuàng)面的愈合,達到迅速封閉難愈創(chuàng)面的目的。2.本實驗提取脂肪間充質干細胞來源外泌體（adipose mesenchymalstem cellsderived exosomes,ADSC-exo）,對肉芽組織來源的成纖維細胞進行干預,并對裸鼠全層皮膚缺損進行治療,試圖找到一種可以促進愈合,減少瘢痕形成的治療方式。方法:1.取手術廢棄的脂肪組織,進行分離、培養(yǎng)ADSC。免疫熒光染色檢測分離的細胞表面免疫標記物CD105、CD90和CD45的表達情況;將分離的細胞向成脂、成骨、成軟骨誘導分化。2.采用超濾濃縮離心法分離ADSC-exo,透射電鏡下觀察其形態(tài);Nanosight檢測外泌體的分布及大小;Western blot檢測外泌體相關蛋白標志物CD81、CD63的蛋白表達。取肉芽組織成纖維細胞并分離、鑒定。3.通過細胞劃痕實驗檢測ADSC-exo能否增加成纖維細胞的遷移能力;通過Transwell培養(yǎng)基檢測ADSC-exo和ADSC在不同時間點對成纖維細... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

原代人脂肪充質干細胞的形態(tài)學觀察,A示培養(yǎng)3天,B示培養(yǎng)8天結果.Figure1-1.ThemorphologyofhADSC,Ashowed3days,Bshowed8dayscultureresults.

圖 1-1. 原代人脂肪充質干細胞的形態(tài)學觀察,A 示培養(yǎng) 3 天, B 示培養(yǎng) 8 天結果.Figure 1-1. The morphology of hADSC,Ashowed 3 days, B showed 8 days culture results.1.2.2 hADSC 成脂、成骨、成軟骨誘導結果1.2.2.1 hADSC 成脂誘導結果:hADSC 在向脂肪細胞誘導分化的過程中，開始時細胞漿中出現(xiàn)細小的脂滴，隨著培養(yǎng)時間延長，脂滴數(shù)量增多，體積增大；誘導第 14 天時，油紅 O 染色呈現(xiàn)紅色，證明該物質為脂肪滴。對照組無明顯變化，油紅 O 染色呈陰性，這提示誘導的 ADSC 有向脂肪細胞分化的趨勢(圖 1-2)。

天津醫(yī)科大學博士學位論文 一、脂肪間充質干細胞的分離與鑒定1.2.2.2 hADSC 成骨誘導結果:hADSC 向成骨細胞誘導分化后第 7 天，胞體增大，突起增多，胞核變大變圓細胞，出現(xiàn)細小的鈣化結節(jié)，第 21 天染色后細胞周圍有明顯的鈣沉積，茜素紅染色可形成紅色沉淀。對照組細胞未出現(xiàn)相應變化，仍為長梭形類成纖維細胞狀，這提示誘導的 ADSC 有向成骨細胞分化的趨勢(圖 1-3)。


本文編號：2995747