背景與目的較多研究發(fā)現(xiàn)血清微小RNA（microRNA,miRNA）在疾病診斷或療效判斷中具有重要的潛在價(jià)值。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重抑郁癥患者腦脊液和血清中miRNA-221-3p（miR-221-3P）相對(duì)含量均明顯高于正常個(gè)體,可作為臨床抑郁癥患者血清中的生物學(xué)標(biāo)志。但到目前為止,血清中miR-221-3P含量升高多少對(duì)輔助判斷圍術(shù)期抑郁情緒有意義并不清楚。因此,本實(shí)驗(yàn)擬首先測(cè)定圍術(shù)期不同抑郁情緒狀態(tài)的患者血清miR-221-3P相對(duì)含量。在此基礎(chǔ)上,通過構(gòu)建miR-221-3p的標(biāo)準(zhǔn)品,檢測(cè)無抑郁個(gè)體、抑郁情緒患者血清中miR-221-3p的絕對(duì)含量,最后對(duì)血清miRNA-221-3p含量與患者抑郁情緒行相關(guān)性分析。通過此研究,希望進(jìn)一步明確檢測(cè)血清miR-221-3p含量在輔助判斷圍術(shù)期抑郁情緒中的潛在價(jià)值和意義。方法1.收集符合條件的患者圍術(shù)期血清,行PHQ-9抑郁量表評(píng)分,根據(jù)評(píng)分值分為無抑郁組、輕度抑郁情緒組、中度及以上抑郁情緒組。2.利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定患者血清miR-221-3p相對(duì)含量。3.提取樣品血清總RNA,用特異性miRNA-221-3p引物反轉(zhuǎn)錄獲... 

【文章來源】：西南醫(yī)科大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

含有T7啟動(dòng)子和miRNA-221-3p序列的DNA片段序列

dH2O 8 μl，總反應(yīng)體積 20 μl。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性 10 分鐘，然后 95℃ 10 秒，60℃ 60 秒共 40 個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后對(duì) Ct 值等結(jié)果進(jìn)分析構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié) 果1. miRNA-221-3p 擴(kuò)增提取人血清樣品中的總 RNA，以反轉(zhuǎn)錄所得的含有 miR-221-3p 的 DNA片段為模板，通過實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應(yīng)進(jìn)行擴(kuò)增（片段序列如圖 2，93bp），獲得產(chǎn)物用 1.2%瓊脂凝膠電泳，結(jié)果如圖 3 所示，于 100bp 左右獲得目的條帶。

圖 3 miR-221-3p 電泳結(jié)果Fig 3.Electrophorogram of miR-221-3p注：Marker：DL2000；1：PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物2. 重組質(zhì)粒 pcDNA3.1-miRNA-221將含有兩個(gè)相同酶切位點(diǎn)的純接重組，并對(duì)連接產(chǎn)物進(jìn)行純化、中的重組質(zhì)粒電泳反應(yīng)后可見明顯是否帶有目的基因 miRNA-221-3p，分析目的基因片段序列。測(cè)序結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]急性單核細(xì)胞白血病特異性miRNA分子標(biāo)志物的鑒定[J]. 劉金立,劉淑閣,熊倩,韓麗,李偉,王萬恒,張昭軍,李全貞.  溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(10)
[2]疼痛和抑郁共患機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 謝曉燕,張娟,趙莉.  中國疼痛醫(yī)學(xué)雜志. 2016(01)
[3]共沉默miR-221-3p/222-3p表達(dá)抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及促成軟骨分化[J]. 閆繼紅,楊姝,孫海梅,曹丹丹,張秀英,季鳳清,郭多,吳波,孫婷怡,周德山.  中國組織工程研究. 2015(50)
[4]內(nèi)鏡下兩種不同方法治療胃息肉200例療效比較分析[J]. 延喜勝.  中國初級(jí)衛(wèi)生保健. 2015(08)
[5]全胸腔鏡聯(lián)合非氣腹腹腔鏡輔助食管癌根治術(shù)與常規(guī)手術(shù)的療效比較[J]. 段東奎.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2015(04)
[6]MicroRNA在突觸可塑性中的作用[J]. 胡雪玲,孫麗華.  中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2014(36)
[7]MicroRNA與神經(jīng)發(fā)生和腦衰老[J]. 黃華明,阮杰,鄭慧玲,劉新光.  國際老年醫(yī)學(xué)雜志. 2014 (06)
[8]原發(fā)性肝癌不同血瘀證患者肝組織微小RNA表達(dá)差異的初步研究[J]. 李夢(mèng)萍,曹海明,武哲麗,葉小衛(wèi),陳新林,付順軍,陶文慧.  山東醫(yī)藥. 2014(38)
[9]應(yīng)激和抑郁[J]. 李凌江,馬寧.  臨床精神醫(yī)學(xué)雜志. 2014(01)
[10]慢性應(yīng)激性抑郁發(fā)生中海馬糖皮質(zhì)激素對(duì)BDNF的影響[J]. 馬學(xué)萍,安書成.  陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(06)



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