目的本研究的主要目的是探討體內(nèi)回輸正常Treg細胞及改變miR-146a表達水平的Treg細胞對小鼠心臟移植免疫排斥反應(yīng)的影響。方法首先我們在體外采用流式細胞儀分選近交系C57小鼠脾臟中的CD4⁺CD25⁺Treg細胞,然后把分選的細胞應(yīng)用磁珠原理的美天旎擴增試劑盒聯(lián)合高濃度IL-2進行體外擴增。參照文獻及課題組前期實驗,為達到上調(diào)或下調(diào)Treg細胞中miR-146a的表達水平的目的,我們分別通過miR-146a agomir及antagomir進行細胞調(diào)控。建立小鼠腹部異位心臟移植模型,分別設(shè)立生理鹽水對照組,正常Treg組,miR-146a上調(diào)組,和miR-146a下調(diào)組。各組模型建立完成后立即通過小鼠陰莖背靜脈注射回輸相應(yīng)Treg細胞（細胞數(shù)量為1×10⁶）,觀察供心存活情況測得生存曲線,在術(shù)后第7天取供心進行病理學(xué)分析,采用流式細胞術(shù)檢測各組受體脾臟中T細胞亞群,為了解供心中細胞因子的表達水平的變化采用RT-PCR檢測IFN-γ、IL-4和IL-17。結(jié)果1.流式分選所得Treg細胞純度為89.5%。經(jīng)擴增試劑盒... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

實驗第一部分流程圖

1.2 流式分選示意圖1.1.4.3 體外擴增 CD4+CD25+調(diào)節(jié) T 細胞目前對于 CD4+CD25+調(diào)節(jié) T 細胞獲得有多種方法，但是不能滿足用體外擴增有多種辦法，主要都是采用磁珠刺激的方法，我們主要依靠試劑IL-2，試劑盒選用為多的美天旎[45]。(1)擴增試劑盒相關(guān)原理：擴增原理是磁珠。擴增比例沿用課題組前期實驗基數(shù)為 3：1，并按照 2000加入 rIL-2。(2)操作步驟：1).樣本制備將 Treg 細胞充分吹勻。2) 擴增試劑的預(yù)處理①將擴增試劑充分混勻，并按 6×107/ml 的濃度移到 10ml 離心管中。②450μL 完全培養(yǎng)基洗滌一次。

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文.1.5 統(tǒng)計方法全部實驗數(shù)據(jù)均采用 SPSS19.0 軟件包對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理,P<水平有統(tǒng)計學(xué)意義。數(shù)據(jù)采用單因素方差分析表示。.2 結(jié)果.2.1 分選及擴增前后 Treg 細胞活性純度及 miRNA146a 表達水式測定.2.1.1 活性、純度檢測Treg 細胞經(jīng)體外擴增試劑盒聯(lián)合高濃度 IL-2 進行擴增。Treg 細胞的數(shù)迅速增長,體外細胞數(shù)比擴增前提高 10 倍。通過流式細胞術(shù)檢測純化和reg 細胞和 Treg,CD4CD25 雙陽性細胞純度為 89%和 93.5%。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小鼠腹部心臟移植模型建立及并發(fā)癥預(yù)防[J]. 郁雷,高麗.  中國胸心血管外科臨床雜志. 2014(02)
[2]CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞體內(nèi)外培養(yǎng)擴增方法的研究進展[J]. 王永磊,朱志軍.  器官移植. 2012(05)
[3]小鼠腹部異位心臟移植模型制作的改良(附視頻)[J]. 劉小孫,張富祥,容松.  中華移植雜志(電子版). 2012(01)

碩士論文
[1]不同劑量地西他濱對調(diào)節(jié)性T細胞的影響[D]. 李慶賀.天津醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號：2926158