目的本研究的主要目的是探討體內(nèi)回輸正常Treg細(xì)胞及改變miR-146a表達(dá)水平的Treg細(xì)胞對(duì)小鼠心臟移植免疫排斥反應(yīng)的影響。方法首先我們?cè)隗w外采用流式細(xì)胞儀分選近交系C57小鼠脾臟中的CD4⁺CD25⁺Treg細(xì)胞,然后把分選的細(xì)胞應(yīng)用磁珠原理的美天旎擴(kuò)增試劑盒聯(lián)合高濃度IL-2進(jìn)行體外擴(kuò)增。參照文獻(xiàn)及課題組前期實(shí)驗(yàn),為達(dá)到上調(diào)或下調(diào)Treg細(xì)胞中miR-146a的表達(dá)水平的目的,我們分別通過(guò)miR-146a agomir及antagomir進(jìn)行細(xì)胞調(diào)控。建立小鼠腹部異位心臟移植模型,分別設(shè)立生理鹽水對(duì)照組,正常Treg組,miR-146a上調(diào)組,和miR-146a下調(diào)組。各組模型建立完成后立即通過(guò)小鼠陰莖背靜脈注射回輸相應(yīng)Treg細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)量為1×10⁶）,觀察供心存活情況測(cè)得生存曲線,在術(shù)后第7天取供心進(jìn)行病理學(xué)分析,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組受體脾臟中T細(xì)胞亞群,為了解供心中細(xì)胞因子的表達(dá)水平的變化采用RT-PCR檢測(cè)IFN-γ、IL-4和IL-17。結(jié)果1.流式分選所得Treg細(xì)胞純度為89.5%。經(jīng)擴(kuò)增試劑盒... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)第一部分流程圖

1.2 流式分選示意圖1.1.4.3 體外擴(kuò)增 CD4+CD25+調(diào)節(jié) T 細(xì)胞目前對(duì)于 CD4+CD25+調(diào)節(jié) T 細(xì)胞獲得有多種方法，但是不能滿(mǎn)足用體外擴(kuò)增有多種辦法，主要都是采用磁珠刺激的方法，我們主要依靠試劑IL-2，試劑盒選用為多的美天旎[45]。(1)擴(kuò)增試劑盒相關(guān)原理：擴(kuò)增原理是磁珠。擴(kuò)增比例沿用課題組前期實(shí)驗(yàn)基數(shù)為 3：1，并按照 2000加入 rIL-2。(2)操作步驟：1).樣本制備將 Treg 細(xì)胞充分吹勻。2) 擴(kuò)增試劑的預(yù)處理①將擴(kuò)增試劑充分混勻，并按 6×107/ml 的濃度移到 10ml 離心管中。②450μL 完全培養(yǎng)基洗滌一次。

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文.1.5 統(tǒng)計(jì)方法全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用 SPSS19.0 軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P<水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。數(shù)據(jù)采用單因素方差分析表示。.2 結(jié)果.2.1 分選及擴(kuò)增前后 Treg 細(xì)胞活性純度及 miRNA146a 表達(dá)水式測(cè)定.2.1.1 活性、純度檢測(cè)Treg 細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增試劑盒聯(lián)合高濃度 IL-2 進(jìn)行擴(kuò)增。Treg 細(xì)胞的數(shù)迅速增長(zhǎng),體外細(xì)胞數(shù)比擴(kuò)增前提高 10 倍。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)純化和reg 細(xì)胞和 Treg,CD4CD25 雙陽(yáng)性細(xì)胞純度為 89%和 93.5%。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠腹部心臟移植模型建立及并發(fā)癥預(yù)防[J]. 郁雷,高麗.  中國(guó)胸心血管外科臨床雜志. 2014(02)
[2]CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞體內(nèi)外培養(yǎng)擴(kuò)增方法的研究進(jìn)展[J]. 王永磊,朱志軍.  器官移植. 2012(05)
[3]小鼠腹部異位心臟移植模型制作的改良(附視頻)[J]. 劉小孫,張富祥,容松.  中華移植雜志(電子版). 2012(01)

碩士論文
[1]不同劑量地西他濱對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響[D]. 李慶賀.天津醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號(hào)：2926158