目的:1.脊髓神經(jīng)元的體外分離、原代培養(yǎng)及鑒定;2.構(gòu)建血紅素加氧酶-1（Heme oxygenase-1,HO-1）過表達(dá)重組腺相關(guān)病毒（Adeno-associated virus,AAV）載體（AAV-HO-1）;3.探討AAV-HO-1對脊髓神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷后MLK3/MKK7/JNK3信號通路的影響;4.探討AAV-HO-1對大鼠脊髓損傷（Spinal cord injury,SCI）后MLK3/MKK7/JNK3信號通路的影響。方法:1.采用胰蛋白酶消化聯(lián)合機(jī)械法分離胚胎脊髓神經(jīng)元,應(yīng)用β-tubulin-III染色和神經(jīng)元核心抗原（Neuron specific nuclear protein,NeuN）免疫熒光染色法鑒定脊髓神經(jīng)元;2.構(gòu)建AAV-HO-1;3.采用H₂O₂建立原代培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷模型;通過蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）和免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）檢測脊髓神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷后HO-1、MLK3、p-MLK3、MKK7、p-MKK7、JNK3、p-J... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

原代培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元第5d×200

圖 1-2 原代培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元的鑒定A：細(xì)胞核染色 B：β tubulin-III 染色情況 C：圖片融合后3 原代脊髓神經(jīng)元 NeuN 免疫熒光染色經(jīng)過 NeuN 染色后細(xì)胞核染成藍(lán)色，脊髓神經(jīng)元染成紅色，結(jié)果如下。圖 1-3 原代脊髓神經(jīng)元 NeuN 免疫熒光染色A：細(xì)胞核染色 B：脊髓神經(jīng)元染色情況 C：圖片融合后三 討論

圖 1-3 原代脊髓神經(jīng)元 NeuN 免疫熒光染色A：細(xì)胞核染色 B：脊髓神經(jīng)元染色情況 C：圖片融合后三 討論1 神經(jīng)元的培養(yǎng)體外培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元是 SCI 病理生理、損傷修復(fù)以及相關(guān)細(xì)胞信號通路等的研究基礎(chǔ)。但是，體外培養(yǎng)神經(jīng)元對環(huán)境變化非常敏感。因而獲得高純度、高細(xì)胞豐度的脊髓神經(jīng)元對于之后的實驗尤為重要。首先我們選取了孕 16 d 的大鼠胚胎，此時胎鼠脊髓神經(jīng)元未完全分化、易于存活，且神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育尚未成熟，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞較少，因而能分離到純度較高的脊髓神經(jīng)元[16]。其次，我們進(jìn)行神經(jīng)元的培養(yǎng)，神經(jīng)元為貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，需粘附在基質(zhì)上生長，預(yù)先包被多聚賴氨酸有助于神經(jīng)元貼壁。目前神經(jīng)元的體外培養(yǎng)體系一般分為兩種：一種是 DMEM/F12+胎牛血清的培養(yǎng)體系，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腺相關(guān)病毒介導(dǎo)血紅素加氧酶-1基因轉(zhuǎn)移對大鼠脊髓損傷的保護(hù)作用[J]. 林文平,王思遠(yuǎn),鄭煜暉,柯慶峰,施進(jìn)興,肖丹蕊.  中華實驗外科雜志. 2018 (01)
[2]脊髓損傷基因治療的研究現(xiàn)狀和進(jìn)展[J]. 楊彥玲.  臨床神經(jīng)病學(xué)雜志. 2011(06)



本文編號：2925308