目的探討白藜蘆醇（resveratrol,RES）對退變髓核細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix,ECM）表達的調(diào)控作用及其相關(guān)分子機制。方法選取臨床上接受椎間盤摘除術(shù)的10例患者,其中5例為年輕脊柱爆裂骨折患者,作為對照組;余5例為老年腰椎間盤突出癥患者,作為退變組。取兩組患者髓核組織,免疫組織化學(xué)染色比較β-catenin的原位表達,Western blot檢測β-catenin、II型膠原和聚集蛋白聚糖（Aggrecan）蛋白表達。取退變組髓核組織分離、培養(yǎng)髓核細(xì)胞（nucleusβulβosus,NP）,分別用IL-1β單獨（B組）或聯(lián)合RES（C組）刺激第3代細(xì)胞,并設(shè)未刺激細(xì)胞空白對照組（A組）,Western blot檢測II型膠原和Aggrecan蛋白表達。進一步采用小干擾RNA（small interfering RNA,siRNA）靶向沉默SIR1江1和β-catenin后,采用Western blot、實時熒光定量PCR檢測β-catenin、SIRT1蛋白和基因表達;用RES,IL-1ββ,SIRT1-siRNA分別或組合刺激NP細(xì)胞后分為空白... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１免疫組織化學(xué)染色檢測兩組髓核組織Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ蛋白表達（ｘ２００）箭頭示ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ表達陽??細(xì)ａ．組ｂ．組??

??Ａｇｇｒｅｃａｎ蛋白相對表達量顯著下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。見圖２。??２．２?ＲＥＳ對釀核細(xì)胞ＥＣＭ表達的影響??＼＼＾８〖６１１＾１〇１：檢測示，８組卩－＃Γ保叮保必?保鋇鞍紫嘍員澩锪肯災(zāi)?哂諶�、（＾组�?保斃停崳?膠原和Ａｇｇｒｅｃａｎ相對表達量顯著低于Ａ、Ｃ組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；??Ａ、Ｃ組間比較各蛋白相對表達量未見明顯差異（Ｐ＞０．０５）。見圖３。??２．３?ｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染靶向沉默ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ和ＳＩＲＴ１表達??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測及實時突光定量ＰＣＲ檢測均顯示，ｃ組Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ、ＳＩＲＴ１蛋??白及基因相對表達量均顯著低于ａ、ｂ組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）；?＝ａ、ｂ兩??組Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ和ＳＩＲＴ１蛋白相對表達量比較未見明顯差異（Ｐ＞０．０５）見圖４、５。??２．４?ＲＥＳ調(diào)控ＥＣＭ表達的信號通路檢測??２．４．１細(xì)胞免疫焚光染色檢測ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ核轉(zhuǎn)位情況??熒光顯微鏡下可見對１組Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ蛋白散在表達在胞漿內(nèi)，胞質(zhì)呈現(xiàn)綠色熒??光；而２組髓核細(xì)胞在ＩＬ－１Ｐ刺激下，ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ主要呈現(xiàn)細(xì)胞核內(nèi)表達，細(xì)胞核表??達綠色熒光

＿．＾?組??鬆。６＿?‘?四＝??Ｉ?？畫?＿?ＩＩ??Ｉ?ａ４？圍驗?圍ｉ??§?〇，?■?ｉ?＿?１１１?ｉ?＾??皿。。丨Ｕ?＿圍丨ｄ?Ｍ圍??Ｐ?－ｃａｔｅｎｉｎ?ＳＩＲＴ１??圖４?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｍｏｔ檢測ｓｉＲＮＡ干擾實驗３組髓核細(xì)胞ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ、ＳＩＲＴ１蛋白表達?ａ．電泳圖??１：?ａ組２：?ｂ組３：?ｃ組；ｂ．各蛋白相對表達量??Ｆｉｇｕｒｅ．４：?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ｗａｓ?ｕｓｅｄ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ?ａｎｄ?ＳＩＲＴ１?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎ??ｔｈｅ?ｔｈｒｅｅ?ｇｒｏｕｐｓ．ａ．ｅｌｃｃｔｒｏｐｈｏｒｅｇｒａｍ?ｌ．ａ?ｇｒｏｕｐ?２．ｂ?ｇｒｏｕｐ?３．ｃ?ｇｒｏｕｐ；ｂ．?ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ??ｅａｃｈ?ｐｒｏｔｅｉｎ．??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2924339