目的:探討Sigma-1受體和pro NGF等在IL-6或缺氧復氧誘導乳鼠心肌損傷下的變化及與凋亡的關系。方法:1.建立IL-6誘導的乳鼠心肌細胞損傷模型。具體方法為:分離SPF級新生SD大鼠乳鼠心肌細胞,培養(yǎng)48h后行細胞計數(shù)并隨機分為正常組(Nor組)、IL-6(400μg/L)組、IL-6(800μg/L)組、IL-6(1200μg/L)組。其中Nor組于37°C培養(yǎng)箱中常氧持續(xù)培養(yǎng)24h,余各組加入上述不同濃度IL-6后按Nor組培養(yǎng)24h,于24h末利用流式細胞儀測定各組乳鼠心肌細胞凋亡率,以凋亡率達50%左右組別的濃度作為后續(xù)實驗IL-6誘導細胞損傷干預濃度。2.分離SPF級新生SD大鼠乳鼠心肌細胞,培養(yǎng)48h后行細胞計數(shù)并隨機分為正常組(Nor組)、IL-6組、缺氧/復氧組(H/R組)、IL-6+H/R組,其中Nor組37℃培養(yǎng)箱中持續(xù)培養(yǎng)24h;IL-6組在培養(yǎng)基中加入濃度為800μg/L的IL-6后培養(yǎng)同Nor組;H/R組先缺氧8h,再復氧16h處理;IL-6+H/R組則在培養(yǎng)基中加入IL-6后余處理同H/R組。各組于24h末通過流式細胞儀測定乳鼠心肌細胞凋亡率,通過Real-time-PCR檢測pro NGF、p75NTR、sortilin及Sigma-1受體的表達,并用western blot檢測pro NGF蛋白的表達。結果:1.各組誘發(fā)乳鼠心肌細胞凋亡情況:與Nor組相比,IL-6組、H/R組、IL-6+H/R組心肌細胞凋亡率均明顯上升(P(27)0.05),其中IL-6+H/R組凋亡率較IL-6組及H/R組升高明顯(P(27)0.05),而IL-6組凋亡率高于H/R組(P(27)0.05)。2.IL-6和H/R處理后乳鼠心肌細胞pro NGF、p75NTR、sortilin及Sigma-1受體m RNA水平的改變:IL-6組、H/R組、IL-6+H/R組與Nor組相比,pro NGF、p75NTR、sortilin、Sigma-1受體m RNA表達增多(P0.05),同時結果顯示,IL-6組pro NGF、p75NTR、Sigma-1受體m RNA表達較IL-6+H/R組低但高于H/R組(P0.05),而sortilin m RNA在IL-6組、H/R組、IL-6+H/R各組間差異均無意義(P0.05)。3.IL-6和H/R處理后乳鼠心肌細胞pro NGF蛋白的表達量變化:H/R組心肌細胞pro NGF蛋白表達量較Nor組、IL-6組及IL-6+H/R組高,差異有統(tǒng)計學意義(P(27)0.05);Nor組與IL-6組、IL-6+H/R組之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:1.IL-6或H/R可上調pro NGF、p75NTR、sortilin及sigma-1受體m RNA基因的表達,且H/R可上調pro NGF蛋白的表達,但IL-6無此效應;2.IL-6或H/R均可誘導乳鼠心肌細胞凋亡,其機制可能與sigma-1受體、p75NTR及sortilin m RNA基因表達上調有關;3.pro NGF參與H/R誘導的乳鼠心肌細胞凋亡,而IL-6誘導的乳鼠心肌細胞凋亡與此可能無關;4.IL-6、H/R誘導乳鼠心肌細胞凋亡二者具有加和效應。
【學位單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R614
【部分圖文】：

學院碩士學位論文 鄭果SD 大鼠乳鼠原代心肌細胞分離培養(yǎng)結果置顯微鏡下可見所培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞為梭形或多角形、單個或集落樣伸壁生長。細胞內致密，折光率高，胞質因含有顆粒樣物質而顯得粗糙；胞核圓形且顏色稍深，內含核仁 1~2 個，培養(yǎng) 48 小時后細胞單層融合并可見自培養(yǎng) 72 小時可見伸出的偽足相互交織成網，形成簇狀且同步搏動的細胞團

圖 2 不同濃度 IL-6 誘導乳鼠心肌細胞凋亡散點圖ig 2 Scatter plot of cardiomyocyte apoptosis induced by different concentrations of IL-6neonate rats表 1 不同濃度 IL-6 作用時乳鼠心肌細胞凋亡率的變化(n＝3， x 士 s)Tab 1 Changes of cardiomyocyte apoptosis rate in neonate rats treated with differentconcentrations of IL-6 (n＝3， x 士 s)與 Nor 組相比，aP＜0.05；與400 μg/L組相比，bP＜0.05；與 800 μg/L組相比，cP＜0IL-6 濃度 細胞凋亡率（％）Nor 組 －400 μg/L3.36 0.40400 μg/L 組 8.14 0.65a800 μg/L 組 800 μg/L 46.03 4.26ab1200 μg/L 組 1200 μg/L 74.23 1.12abc

圖 3 不同濃度 IL-6 作用乳鼠心肌細胞凋亡率柱狀圖 3 Bar chart of cardiomyocyte apoptosis rate in neonate rats treated with differentconcentrations of IL-6注：*P<0.05，n＝3誘導乳鼠心肌細胞凋亡情況or組相比，IL-6組、H/R組、IL-6+H/R組心肌細胞凋亡率均明顯上升（P 0+H/R 組凋亡率較 IL-6 組及 H/R 組升高明顯（P 0.05），而 IL-6 組凋亡 組（P 0.05）（圖 4、圖 5、表 2）。

【參考文獻】

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1 Tonglin Lu;Zhiping Hu;Liuwang Zeng;Zheng Jiang;;Changes in secretory pathway Ca~(2+)-ATPase 2 following focal cerebral ischemia/reperfusion injury[J];Neural Regeneration Research;2013年01期

本文編號：2820980