目的Extracellular signal-regulated kinase(ERK)5作為調(diào)控成骨細(xì)胞增殖的重要細(xì)胞因子,但對其上游下游影響因子的研究目前還比較匱乏。本論文以ERK5入手,發(fā)現(xiàn)并研究其上游因子NFATc1(Nuclear factor of activated T-cells c1)和ERK5之間的關(guān)系,同時探討通過何種信號通路的作用達(dá)到促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和功能發(fā)揮。方法對成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),給予流體剪切力(FSS,12dyn/cm~2)、XMD8-92(5μM,特異性ERK5抑制劑)、CsA(NFATc1抑制劑)或EGF(20ng/ml)刺激,用western blot檢測NFATc1、ERK5、p-ERK5、E2F2、cyclin E1、BMP7蛋白水平變化,用免疫熒光技術(shù)檢測ERK5、p-ERK5以及NFATc1亞細(xì)胞定位,用MTT檢測成骨細(xì)胞活性,用PCR array檢測相關(guān)蛋白在不同干預(yù)條件下mRNA表達(dá)水平。結(jié)果對成骨細(xì)胞加載12dyn/cm~2流體剪切力后,成骨細(xì)胞中ERK5被磷酸化,形成p-ERK5的活化狀態(tài),同時NFATc1表達(dá)量顯著提升,通過分別給予XMD8-92以及CsA后,發(fā)現(xiàn)CsA能抑制NFATc1表達(dá)的同時抑制ERK5磷酸化,但XMD8-92僅能抑制ERK5磷酸化,而無法抑制NFATc1表達(dá)。另外,CsA能夠抑制NFATc1核轉(zhuǎn)位,同時也能使p-ERK5核轉(zhuǎn)位顯著降低,但XMD8-92對NFATc1無影響,顯然NFATc1通過磷酸化ERK5,使p-ERK5發(fā)生核轉(zhuǎn)位。同時通過對增殖相關(guān)因子檢測,發(fā)現(xiàn)在流體剪切力正性調(diào)控NFATc1和ERK5時,E2F2和cyclin E1表達(dá)量能被顯著提升,而且CsA和XMD8-92均能抑制這一作用以及成骨細(xì)胞活性。此外,用CsA和XMD8-92抑制NFATc1和ERK5活化后,BMP7表達(dá)量有顯著降低。結(jié)論NFATc1介導(dǎo)流體剪切力對ERK5的活化,NFATc1是ERK5的上游因子,同時NFATc1能磷酸化ERK5促使p-ERK5入核發(fā)揮功能。NFATc1-ERK5信號通路通過E2F2和cyclin E1促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖。并且NFATc1-ERK5信號通路介導(dǎo)FSS促進(jìn)BMP7表達(dá)。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R68
【部分圖文】：

FSS促進(jìn)NFATc1表達(dá)

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 NFATc1-ERK5 通路介導(dǎo) FSS 促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和 BMP7 表達(dá)后，給予 EGF 干預(yù)，western blot 檢測 NFATc1 表達(dá)。（B）定量分析 NFATc1/β-actin比值。（C）FSS 以及伴或不伴有 CsA 預(yù)刺激對 NFATc1 表達(dá)的影響。（D）定量分析 NFATc1/β-actin 比值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，n=3，*p㩳0.05，**p㩳0.01，***p㩳0.001。3.2 ERK5 能被 FSS 磷酸化活化

B），這與前期研究結(jié)果相符。ATc1 介導(dǎo) FSS 磷酸化 ERK5研究 NFATc1 與 ERK5 在成骨細(xì)胞中的調(diào)控關(guān)系，分別給予 5μM XMD8-92 1h 干預(yù)。如圖所示，F(xiàn)SS 提升 NFATc1 表達(dá)這兩者的上調(diào)均能夠被 CsA 所抑制，但 XMD8-92 僅能抑制降低 NFATc1 表達(dá)水平（p＜0.001，如圖 2C, E）。顯然，N5 在 FSS 作用下的磷酸化過程，NFATc1 是 ERK5 上游因子。不同 XMD8-92 干預(yù)時程是否對 NFATc1 產(chǎn)生影響，我們給92 不同干預(yù)時間（1h、2h 和 3h）刺激以檢測 NFATc1 和 p- XMD8-92 干預(yù) 1h，p-ERK5 水平就會明顯降低（p＜0.001，預(yù)時間延長，p-ERK5 進(jìn)行性降低（p＜0.001，如圖 2F, H）沒有明顯變化。因此，NFATc1 表達(dá)不會受 XMD8-92 影響S 促進(jìn) ERK5 磷酸化是通過 NFATc1 實(shí)現(xiàn)的。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李善昌;趙剛;王飛飛;付雅楠;;小檗堿對小鼠成骨細(xì)胞增殖和成骨活性的影響[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2016年06期

2 向英;張勇;;金雀異黃素對成骨細(xì)胞增殖和分化的影響[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2007年S1期

3 齊錦生,李恩,王芳;丹皮酚對過氧亞硝基陰離子致成骨細(xì)胞增殖抑制的影響[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2003年02期

4 盧宇;費(fèi)小薔;;吡格列酮對小鼠成骨細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2017年09期

5 姚曼;梁淑芳;程彬彬;凌昌全;;人參皂苷促進(jìn)小鼠成骨細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2015年09期

6 劉冰;盧蕾陽;高飛;楊靜;;胰島素樣生長因子-1對甲狀旁腺激素介導(dǎo)成骨細(xì)胞增殖及成骨活性的影響[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2014年11期

7 陳述祥;康樂;;中藥促成骨細(xì)胞增殖和分化的機(jī)制與作用[J];中國組織工程研究;2012年07期

8 王東;蘇宜香;;染料木黃酮對人成骨細(xì)胞增殖及分化影響[J];中國公共衛(wèi)生;2009年03期

9 邵培;曹桂芬;趙美林;侯海娟;黃萍;;中藥桂皮醛對成骨細(xì)胞增殖及成骨功能的影響[J];中國口腔種植學(xué)雜志;2009年04期

10 金鑫;李靈芝;唐存貴;;大黃酸-雌酮對大鼠成骨細(xì)胞增殖和分化的作用[J];武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2008年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 楊武斌;王平;;鹿角膠對成骨細(xì)胞增殖和分化的影響[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥實(shí)驗(yàn)藥理分會2014年學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2014年

2 王志;陽世勇;韓博;;氟通過重組細(xì)胞骨架影響小鼠成骨細(xì)胞增殖與分化[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(下冊)[C];2010年

3 楊林;陶天遵;柳海峰;吳麗萍;吳瑩;;中藥三花散對體外成人成骨細(xì)胞增殖、分化和凋亡的影響[A];第九屆全國骨質(zhì)疏松年會暨第六屆全國鈣劑年會會議文集[C];2003年

4 楊林;陶天遵;吳麗萍;陶樹清;吳瑩;劉楓晨;劉偉;張淑云;田軍;王新婷;柳海峰;王曉亞;;中藥三花散對體外成人成骨細(xì)胞增殖、分化和凋亡的影響(摘要)[A];第五次全國創(chuàng)傷康復(fù)暨第七次全國運(yùn)動療法學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

5 李盛華;劉坤;宋貴杰;何志軍;;中藥損傷散對體外成骨細(xì)胞增殖與分化的影響[A];第11屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2003年

6 楊林;陶天遵;李曉蕊;吳麗萍;陶樹清;吳瑩;劉楓晨;劉偉;張淑云;田軍;王新婷;柳海峰;王曉亞;;中藥三花散對體外成人成骨細(xì)胞增殖、分化和凋亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第三次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨骨質(zhì)疏松診斷技術(shù)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2004年

7 楊林;陶天遵;劉楓晨;劉偉;張淑云;聞潁;陶樹清;吳麗萍;;地塞米松對成人成骨細(xì)胞增殖和分化影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];第九屆全國骨質(zhì)疏松年會暨第六屆全國鈣劑年會會議文集[C];2003年

8 秦臘梅;肖永華;姜良鐸;;幾種中藥對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞增殖的影響[A];第五次全國中西醫(yī)結(jié)合實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2001年

9 施德源;陳統(tǒng)一;崔大敷;;人工合成成骨生長肽促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖及改善骨質(zhì)疏松的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第三次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨骨質(zhì)疏松診斷技術(shù)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2004年

10 張西正;李彬;郭勇;吳金輝;;不同應(yīng)變對成骨細(xì)胞增殖活性及功能狀態(tài)的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會2004年年會論文集[C];2005年

相關(guān)重要報紙文章 前3條

1 殷曉雪 陳仲強(qiáng) 黨耕町;北京大學(xué)——淫羊藿苷可促進(jìn)人成骨細(xì)胞增殖與分化[N];中國醫(yī)藥報;2006年

2 記者　 徐朝暉;“迪耳”8年攻關(guān)國家“863計劃”[N];金華日報;2006年

3 首席記者 徐朝暉;“迪耳”攻克我市首個“863項(xiàng)目”[N];金華日報;2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 鐘近潔;氟對成骨細(xì)胞增殖及其MCM3基因表達(dá)的影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2006年

2 李鵬;流體剪切力促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖機(jī)制的研究[D];蘭州大學(xué);2012年

3 陳明;0.5Gy X線通過多重信號通路促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖與分化[D];蘇州大學(xué);2014年

4 錢衛(wèi)慶;淫羊藿苷促成骨細(xì)胞增殖中非核效應(yīng)及機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2016年

5 楊力;胰高血糖素樣肽-1改善小鼠成骨細(xì)胞增殖與分化功能的機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

6 鐘俊;OGP作用機(jī)制及其對MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖和粘附作用的研究[D];武漢大學(xué);2012年

7 黃佳;雌二醇通過Wnt/β-catenin信號通路調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞增殖的作用機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2014年

8 黃鋼勇;腦灰質(zhì)促進(jìn)成骨的機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

9 唐曉露;1、羅格列酮對顱骨成骨細(xì)胞增殖及分化的影響及其作用機(jī)制 2、異黃酮類植物雌激素對ERE和CRE轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2014年

10 馮志遠(yuǎn);寡核苷酸（ODN）促成骨細(xì)胞增殖活化的作用及機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 丁寧;NFATc1-ERK5通路介導(dǎo)FSS促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和BMP7表達(dá)[D];蘭州大學(xué);2018年

2 康鑫;葛根素促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖及信號調(diào)控機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2015年

3 賈可麗;流體剪切力對成骨細(xì)胞增殖作用的分子機(jī)制體外實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2012年

4 王長軍;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與成骨細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)對成骨細(xì)胞增殖的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

5 余曉棟;體外沖擊波聯(lián)合血小板衍生生長因子對成骨細(xì)胞增殖的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

6 汪建;持續(xù)與間歇低載荷振動對成骨細(xì)胞增殖及分化能力影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2015年

7 李亞平;外源性金屬離子對原代培養(yǎng)的成骨細(xì)胞增殖、分化及礦化功能的影響[D];河北大學(xué);2011年

8 蔡明軍;鹿茸多肽的提取分離及其促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖作用的研究[D];吉林大學(xué);2008年

9 朱子寬;強(qiáng)骨顆粒載藥血清對成骨細(xì)胞增殖的影響[D];陜西中醫(yī)學(xué)院;2010年

10 孔瑩瑩;乳鐵蛋白的成骨作用機(jī)制及熱處理對其活性影響研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2012年

本文編號：2820206