本文關(guān)鍵詞：人老化椎間盤髓核細(xì)胞體外老化模型的建立與細(xì)胞老化表型的初探，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：構(gòu)建人椎間盤髓核細(xì)胞(nucleus pulposus cells,NPCs)老化模型,探討老化NPCs中生長(zhǎng)因子的表達(dá)差異及其與椎間盤退變(intervertebral disc degeneretion,IDD)的關(guān)系。方法：1、體外單層培養(yǎng)人正常NPCs系(Scien Cell4800),連續(xù)1：2傳代培養(yǎng),誘導(dǎo)建立NPCs復(fù)制性老化(replication senescence cells,RS)模型；2、不同濃度雙氧水作用于未老化NPCs,模擬椎間盤氧化應(yīng)激微環(huán)境,誘導(dǎo)建立應(yīng)激誘導(dǎo)過(guò)早老化(stress induced premature senescence cells,SIPS)模型；3、細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶(Senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)染色檢測(cè)NPCs陽(yáng)性表達(dá)率；4、流式細(xì)胞儀檢測(cè)G1期細(xì)胞比例及細(xì)胞凋亡率。CCK-8檢測(cè)不同代次細(xì)胞增殖活性；5、應(yīng)用Agilent表達(dá)譜芯片初步篩選出正常與老化NPCs中差異性表達(dá)的生長(zhǎng)因子;6、實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)一步驗(yàn)證所篩選生長(zhǎng)因子的表達(dá)差異。結(jié)果：1、NPCs經(jīng)連續(xù)傳代、雙氧水誘導(dǎo)可分別構(gòu)建RS模型及SIPS模型；2、兩種老化模型的SA-β-Gal陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞比例均高于70%,G1期細(xì)胞比例均高于80%,凋亡率均低于10%;3、Agilent表達(dá)譜芯片篩選出的堿性成纖維生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子a(Vascular endothelial growth factor a, VEGF-a)在不同老化模型中,表達(dá)有顯著性差異(p0.05),特別是bFGF在SIPS模型中的表達(dá)顯著高于RS模型(p0.05)。兩種老化模型中的bFGF表達(dá)量顯著高于正常組(p0.05)。結(jié)論：1、雙氧水誘導(dǎo)所引起的氧化應(yīng)激可促進(jìn)細(xì)胞過(guò)早老化;2、老化NPCs上調(diào)bFGF,且SIPS模型中的上調(diào)幅度顯著高于RS,SIPS可能比RS更加上調(diào)bFGF;3、不同老化誘導(dǎo)條件下,生長(zhǎng)因子的表達(dá)可能存在差異,bFGF可能參與椎間盤再血管化及自我修復(fù)。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞老化 生長(zhǎng)因子 椎間盤退變 髓核細(xì)胞 氧化應(yīng)激 雙氧水
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R681.5
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 縮略詞表11-13
• 前言13-14
• 文獻(xiàn)綜述14-26
• 第一章：材料及方法26-33
• 1.1 主要器材、試劑、實(shí)驗(yàn)對(duì)象、時(shí)間及地點(diǎn)26-27
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法27-31
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31
• 1.4 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線31-33
• 第二章：實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-38
• 2.1 人正常與老化髓核細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察33
• 2.2 SA-β-Gal染色33-34
• 2.3 細(xì)胞周期34-35
• 2.4 細(xì)胞凋亡35
• 2.5 CCK-8檢測(cè)不同代次細(xì)胞增殖活性35-36
• 2.6 生長(zhǎng)因子篩選36-37
• 2.7 Real-time PCR檢測(cè)37-38
• 第三章：討論38-41
• 3.1 細(xì)胞老化的兩條信號(hào)通路38
• 3.2 老化的造模標(biāo)準(zhǔn)38
• 3.3 細(xì)胞老化在椎間盤中的作用38-39
• 3.4 生長(zhǎng)因子在椎間盤中的作用39-40
• 3.5 本研究的意義40-41
• 第四章：結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-50
• 致謝50-51
• 作者簡(jiǎn)介51

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 丁志山，沃興德;細(xì)胞調(diào)亡與動(dòng)脈粥樣硬化[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;1998年01期

2 李妍;紀(jì)朋艷;張巍;彭順利;呂士杰;;柴胡皂苷d對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)及凋亡的影響[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年12期

3 嚴(yán)銀芳,陳曉,楊小清,閆遠(yuǎn)芳;流行性腮腺炎病毒減毒株S_(79)在幾株腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞中增殖的比較研究[J];腫瘤;2003年06期

4 劉功讓;管培中;宋淑亮;逯素梅;馮玉新;辛華;;絞股藍(lán)多糖對(duì)四氯化碳損傷HepG2細(xì)胞的保護(hù)作用[J];山東醫(yī)藥;2007年31期

5 肖東杰,汪運(yùn)山;B細(xì)胞被動(dòng)凋亡的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè));1998年05期

6 張運(yùn)濤,劉凡,姜茹,谷仲平,汪涌,張順,劉榮福,李玉梅;外源性p27與GRC-1細(xì)胞端粒酶活性及細(xì)胞凋亡關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2002年09期

7 石和元;王平;胡永年;邱幸凡;田代志;;溫膽湯改良方對(duì)Aβ_(25-35)誘導(dǎo)AD細(xì)胞模型bcl-2、bax蛋白表達(dá)的影響[J];世界科學(xué)技術(shù);2005年06期

8 孟威宏;王強(qiáng);王虹蛟;顏煒群;;牛胰蛋白酶抑制劑研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(老年醫(yī)學(xué)分冊(cè));2008年04期

9 鐘民濤;王曉麗;李星云;劉磊;劉穎麗;張偉;黃敏;;香菇C91-3菌絲發(fā)酵蛋白對(duì)H22腫瘤細(xì)胞體內(nèi)外抗腫瘤機(jī)制的初探[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2011年09期

10 張晨,黃世林,馬東初,孫英慧,馬小鋒;硫化砷誘導(dǎo)NB_4細(xì)胞調(diào)亡[J];白血病;2000年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 鄒萍;;血液系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞來(lái)源膜微粒的特征及生物學(xué)作用研究[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

2 蔣爭(zhēng)凡;卞婕;翟中和;;非細(xì)胞體系誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞核凋亡的超微觀察[A];第十次全國(guó)電子顯微學(xué)會(huì)議論文集（Ⅰ）[C];1998年

3 陳衛(wèi)銀;祝彼得;劉福友;馮雪梅;;參芎滴丸對(duì)急性腦梗死模型大鼠神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

4 謝晶日;李威;梁國(guó)英;楊豐源;;胃靈顆粒對(duì)胃癌前病變細(xì)胞調(diào)亡基因影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)脾胃病分會(huì)第十八次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2006年

5 綦淑芬;萬(wàn)瑞香;姚如勇;;扇貝多肽對(duì)Hela細(xì)胞在紫外線損傷下的保護(hù)作用[A];第五屆全國(guó)自由基生物學(xué)與自由基醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2000年

6 吳李君;裴蓓;王順昌;王軍;湯明禮;;砷和鎘暴露誘導(dǎo)秀麗小桿線蟲(chóng)生殖腺細(xì)胞調(diào)亡及其信號(hào)通路研究[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)第二屆全國(guó)中青年學(xué)者科技論壇會(huì)議論文集[C];2007年

7 余珂;王敬賢;周炳升;;多溴聯(lián)苯醚誘導(dǎo)人神經(jīng)SK-N-SH細(xì)胞調(diào)亡的機(jī)理[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆第十七次學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

8 冉新澤;鄭懷恩;王艾平;王鋒超;韓京;;他汀對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞輻射損傷組織因子與細(xì)胞調(diào)亡的影響[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)放射毒理專業(yè)委員會(huì)第七次、中國(guó)毒理學(xué)會(huì)免疫毒理專業(yè)委員會(huì)第五次、中國(guó)環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)致突專業(yè)委員會(huì)第二次、中國(guó)環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)致畸專業(yè)委員會(huì)第二次、中國(guó)環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)致癌專業(yè)委員會(huì)第二次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 崔承彬;閆少羽;蔡兵;趙慶春;姚新生;曲戈霞;;黑果黃皮Clausena dunniana Levl中咔唑生物堿類新細(xì)胞周期抑制劑及細(xì)胞調(diào)亡誘導(dǎo)劑的核磁共振研究[A];第十一屆全國(guó)波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2000年

10 吳耀輝;鄒萍;;Sunrivin基因沉默對(duì)K562細(xì)胞調(diào)亡影響的研究[A];第11次中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張?zhí)锟?細(xì)胞調(diào)亡的意義[N];中國(guó)人口報(bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 羅曉明;載藥聚合物超細(xì)纖維作為腫瘤局部制劑的研究[D];西南交通大學(xué);2014年

2 王石;黃芪甲苷促進(jìn)血管新生的分子機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

3 宋楊;抗CD25單抗對(duì)腎移植患者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞生存和功能改變影響的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 羅忠光;CRL E3泛素連接酶靶向新藥MLN4924在體內(nèi)外殺傷肝癌細(xì)胞的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

5 肖林林;巨噬細(xì)胞對(duì)血管細(xì)胞的輻射旁效應(yīng)及其分子機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 張峰;戊型肝炎病毒基因4型在PLC/PRF/5細(xì)胞中的培養(yǎng)及其特征研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

7 陳鳳華;Tat-SmacN7融合肽對(duì)腫瘤細(xì)胞輻射增敏作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 虞志新;Th17/Treg失衡及其與中性粒細(xì)胞相互影響在ARDS發(fā)病中的作用和機(jī)制研究[D];江蘇大學(xué);2015年

9 黃凌燕;STK33基因在下咽鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

10 袁媛;let-7c介導(dǎo)c-Myc基因調(diào)控逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞多藥耐藥的機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張曉嬌;天然抗氧化劑對(duì)乳腺癌MCF-7/ADM細(xì)胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制研究[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

2 呂超紹;重組人干擾素γ(rhIFN-γ)對(duì)白血病K562細(xì)胞免疫逃逸的影響[D];昆明理工大學(xué);2015年

3 汪建陽(yáng);Ang-(1-7)通過(guò)G蛋白偶聯(lián)受體Mas對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞的影響研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

4 任志濤;小檗堿對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)A549細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和MRC-5細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及細(xì)胞信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

5 楊曉?shī)?重組人p66Shc腺病毒和賴氨藤黃酸鹽對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

6 萬(wàn)愛(ài)英;大分割照射生物效應(yīng)實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)與LQ公式計(jì)算數(shù)據(jù)的比較研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

7 邢曉萌;白藜蘆醇對(duì)肺癌A549細(xì)胞的放射增敏作用及其機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

8 曹曰針;胞外泛素對(duì)Treg細(xì)胞免疫抑制活性的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

9 張曉威;OSW-1與線粒體DNA缺失對(duì)肝癌細(xì)胞PI3K信號(hào)通路的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 余長(zhǎng)松;胰高血糖素樣肽-2對(duì)IPEG-J2細(xì)胞緊密連接表達(dá)與屏障功能的影響及其分子機(jī)制研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：人老化椎間盤髓核細(xì)胞體外老化模型的建立與細(xì)胞老化表型的初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：277903