【摘要】：目的:血管腔內(nèi)治療技術(shù)以其微創(chuàng)的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)成為目前治療動(dòng)脈閉塞性疾病的主要治療方式之一,然而腔內(nèi)介入治療術(shù)后血管再狹窄是一直不可回避的問(wèn)題。本課題組擬采用核轉(zhuǎn)染細(xì)胞過(guò)表達(dá)Periostin蛋白和體內(nèi)細(xì)胞移植干預(yù)的方式對(duì)頸動(dòng)脈損傷模型小鼠進(jìn)行治療并檢測(cè)評(píng)估其效果,致力于尋找更好的腔內(nèi)介入治療術(shù)后血管再狹窄的治療方案。方法:特制高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠四個(gè)月,在飼養(yǎng)前后對(duì)小鼠進(jìn)行稱重和檢測(cè)血脂水平,處死部分小鼠并進(jìn)行頸總動(dòng)脈和肝臟HE染色,觀察組織結(jié)構(gòu)的變化。外購(gòu)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Periostin蛋白內(nèi)皮前體細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)細(xì)胞株并進(jìn)行培養(yǎng)。將過(guò)表達(dá)Periostin蛋白的EPCs、沉默表達(dá)Periostin蛋白的EPCs、正常的EPCs分別經(jīng)尾靜脈注射進(jìn)小鼠體內(nèi)。治療四個(gè)月后,通過(guò)Evans blue染色檢測(cè)損傷頸動(dòng)脈再內(nèi)皮化情況;HE和紅油O染色檢測(cè)損傷動(dòng)脈新生內(nèi)膜增生情況并比較斑塊面積大小;免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定細(xì)胞核抗原Ki67和PCNA表達(dá),間接檢測(cè)細(xì)胞增殖程度。結(jié)果:高脂飲食組小鼠體重增加;血脂水平明顯升高;病理染色提示頸總動(dòng)脈內(nèi)膜破壞增厚,大量斑塊形成;肝臟結(jié)構(gòu)紊亂,大部分肝細(xì)胞腫脹、氣球樣變,內(nèi)有空泡形成。以上結(jié)果提示ApoE-/-小鼠頸動(dòng)脈損傷模型建立成功。觀察細(xì)胞的形態(tài)呈鋪路石樣;免疫組化鑒定細(xì)胞CD34表達(dá)為陽(yáng)性;Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Periostin蛋白在EPCs的穩(wěn)定表達(dá),可以用于后期頸動(dòng)脈損傷模型小鼠的體內(nèi)移植治療。各病理染色結(jié)果表明過(guò)表達(dá)Periostin蛋白能夠促進(jìn)EPCs在小鼠體內(nèi)增殖和損傷頸動(dòng)脈再內(nèi)皮化,效果明顯。結(jié)論:本課題通過(guò)高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠,能夠成功建立頸動(dòng)脈損傷模型小鼠。通過(guò)基因轉(zhuǎn)染的方法構(gòu)建過(guò)表達(dá)Periostin蛋白的EPCs,并進(jìn)行體內(nèi)移植治療,研究結(jié)果表明過(guò)表達(dá)Periostin蛋白的EPCs能促進(jìn)小鼠損傷頸動(dòng)脈再內(nèi)皮化,效果優(yōu)于沉默表達(dá)Periostin蛋白的EPCs和單純EPCs。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R654
【圖文】：

圖 1-1 高脂飼養(yǎng)對(duì)小鼠體重的影響脂變化別在飼養(yǎng)前和每個(gè)月定期采集小鼠靜脈血，檢測(cè)總膽固醇（TCG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（H

圖 1-2 高脂飲食前、后對(duì)各組小鼠各項(xiàng)血脂水平影響注：圖 A、B、C、D 分別為 HDL-C、LDL-C、TC、TG 指標(biāo)隨著時(shí)間變化而變化的水平。1.3.4 小鼠肝臟及頸動(dòng)脈取材照片

圖 1-3 小鼠肝臟和頸總動(dòng)脈及主動(dòng)脈樹(shù)取材注：圖 A 和 B、C、D 分別為對(duì)照組和高脂飲食組小鼠肝臟和頸動(dòng)脈取材過(guò)程片1.3.4 頸總動(dòng)脈和肝臟染色分別在四個(gè)月后取高脂組和對(duì)照組小鼠頸總動(dòng)脈和肝臟前葉，進(jìn)行HE染色圖 1-4 提示：對(duì)照組(A)小鼠頸動(dòng)脈各層次結(jié)構(gòu)完整、清晰，血管內(nèi)膜薄、平滑無(wú)脂質(zhì)沉積和血管平滑肌細(xì)胞增生。高脂飲食組（B）小鼠頸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞被壞，內(nèi)膜增厚、形成大量纖維斑塊帽和粥樣斑塊。圖 1-5 是對(duì)照組和高脂組小肝臟 HE 染色切片。圖 1-5-A 顯示對(duì)照組小鼠肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列均勻規(guī)則，大小一致。細(xì)胞核呈圓形，形狀規(guī)則；肝小葉未見(jiàn)炎癥細(xì)胞和纖維組織生，結(jié)構(gòu)正常。圖 1-5-B 顯示高脂組小鼠肝組織，肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，大部分肝胞形態(tài)不規(guī)則，并可見(jiàn)肝細(xì)胞發(fā)生氣球樣變、空泡變性，內(nèi)有脂質(zhì)淤積，有些胞發(fā)生壞死。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2774651