【摘要】：研究背景肝移植是目前治療終末期肝臟疾病最有效的治療方案。隨著肝移植手術(shù)技術(shù)的提高及圍手術(shù)期管理的完善,我國肝移植術(shù)后1年生存率已經(jīng)達(dá)到80%以上。腦死亡供體是器官移植供體來源的重要組成部分,在腦死亡發(fā)生時機(jī)體兒茶酚胺瞬間大量釋放,導(dǎo)致部分組織、器官出現(xiàn)短暫供血不足。研究報道腦死亡來源的供肝在移植術(shù)后膽道并發(fā)癥發(fā)生率高達(dá)19%,而缺血性膽道損傷(Ischemic-type Biliary Injury,ITBI)是肝移植術(shù)后膽道并發(fā)癥的主要原因。本論文希望通過動物實(shí)驗(yàn)聯(lián)合細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探索腦死亡大鼠供肝移植術(shù)后缺血性膽道損傷及其機(jī)制。目的1.探索大鼠腦死亡是否導(dǎo)致肝移植術(shù)后缺血性膽道損傷2.探索大鼠腦死亡供肝移植術(shù)后缺血性膽道損傷的機(jī)制方法1.構(gòu)建腦死亡大鼠供肝移植模型:實(shí)驗(yàn)計劃分為3組,對照組、正常大鼠供肝移植組和腦死亡大鼠供肝移植組。對照組大鼠不做任何處理,正常大鼠供肝移植組是指正常大鼠獲取肝臟原位移植入另一大鼠體內(nèi),大鼠腦死亡供肝移植組是指將構(gòu)建腦死亡模型成功的大鼠維持6h后獲取肝臟并原位移植入另一大鼠體內(nèi)。2.模型構(gòu)建成功1月后,收集三組膽汁以及肝臟組織,利用ELISA方法檢測膽管損傷標(biāo)志物GGT、LDH的表達(dá);利用HE染色觀察膽管形態(tài)學(xué)的變化;提取肝臟組織蛋白Western Blot檢測上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)相關(guān)標(biāo)志物E-cad、N-cad、FSP-1等,判斷EMT與腦死亡供肝移植缺血性膽道損傷的關(guān)系。3.通過提取正常大鼠原代膽管上皮細(xì)胞,建立原代膽管上皮細(xì)胞缺血再灌注模型以模擬腦死亡過程,使用Western blot方法檢測原代大鼠膽管上皮細(xì)胞進(jìn)行缺血再灌注后JunD及EMT相關(guān)標(biāo)志物E-cad、FSP-1等的表達(dá)變化,推測腦死亡供肝移植術(shù)后缺血性膽道損傷中可能的機(jī)制。結(jié)果1.通過對比正常大鼠組、正常大鼠供肝移植組、腦死亡大鼠供肝移植組的病理切片HE染色表明,正常大鼠肝臟組織中肝細(xì)胞形態(tài)正常,膽管形態(tài)、走形正常;正常大鼠供肝移植組肝臟組織中肝細(xì)胞輕度腫脹、少量毛細(xì)膽管增生、部分肝內(nèi)膽管輕度擴(kuò)張、少量炎癥細(xì)胞浸潤;腦死亡大鼠供肝移植組肝臟組織中可見肝細(xì)胞碎片狀壞死,大量炎癥細(xì)胞浸潤,肝內(nèi)膽管增生明顯、結(jié)構(gòu)紊亂,膽汁淤積膽管擴(kuò)張。對比三組的膽汁生化指標(biāo)GGT、LDH等指標(biāo)發(fā)現(xiàn),腦死亡供肝移植組膽汁內(nèi)GGT、LDH的含量顯著高于正常大鼠組與正常大鼠供肝移植組。2.Western blot檢測三組肝臟組織中EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)。隨著腦死亡供肝移植組膽道損傷的加重,EMT相關(guān)蛋白E-cad下調(diào),同時N-cad、FSP-1等間質(zhì)標(biāo)志物上調(diào)。3.通過Western Blot檢測原代大鼠膽管上皮細(xì)胞對照組、缺血再灌注1h組、缺血再灌注6h組蛋白,發(fā)現(xiàn)EMT相關(guān)蛋白E-cad下調(diào)、FSP-1上調(diào),并且隨著再灌注時間的延長而升高。與此同時,JunD的表達(dá)也有顯著上升。結(jié)論1.腦死亡大鼠供肝移植術(shù)后缺血性膽道損傷加重;2.腦死亡大鼠供肝移植術(shù)后缺血性膽道損傷加重可能的機(jī)制是腦死亡過程引起JunD活化,誘導(dǎo)EMT發(fā)生引起肝移植術(shù)后的缺血性膽道損傷;
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R657.3
【圖文】：

ELISA檢測正常大鼠組、正常大鼠供肝移植組、腦死亡大鼠供肝移植組中膽汁中GGT、

HE染色觀察正常大鼠組、正常大鼠供肝移植組、腦死亡大鼠供肝移植組膽管形態(tài)學(xué)變化；

Westernblot檢測正常大鼠組、正常大鼠供肝移植組、腦死亡大鼠供肝移植組中，EMT

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2757463