【摘要】：目的:研究促紅細(xì)胞生成素(EPO)對心臟移植后心肌損傷的影響及其與PKC通路的關(guān)系研究。方法:通過同系大鼠心臟移植來建立心肌缺血再灌注損傷模型,實(shí)驗(yàn)分為兩批(5天、10天),每批將SD雄性成年大鼠分成5組:假手術(shù)組(A組);單純心臟移植空白對照組(B組);心臟移植+EPO治療組(C組);心臟移植+EPO治療+PKC抑制劑組(D組);心臟移植+EPO+PKC激動劑組(E組)。第一批術(shù)后第5天,第二批術(shù)后第10天處死各組大鼠,各組標(biāo)本進(jìn)行HE染色,觀察組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)損害及細(xì)胞浸潤程度,采用免疫組織化學(xué)法檢測各組心肌組織中EGFR蛋白表達(dá)水平,蛋白免疫印跡雜交法(Western Blot)檢測磷酸化PKC及PLC-γ1,特殊試劑盒檢測組織MDA、ATP酶、GSH-Px、鈣離子水平。結(jié)果:1.HE染色結(jié)果:A組心肌結(jié)構(gòu)完整,排列緊密,無異常改變;B組,5天時(shí)的心肌結(jié)構(gòu)排列疏松、炎細(xì)胞浸潤明顯、組織有出血,10天時(shí)的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)更加紊亂疏松、炎癥浸潤程度顯著、組織出血更明顯,有明顯結(jié)構(gòu)破壞;C組,5天時(shí)有少量炎癥細(xì)胞浸潤、結(jié)構(gòu)尚完整、有少量組織出血,10天時(shí)心肌組織基本趨于正常、結(jié)構(gòu)緊密、無顯著細(xì)胞浸潤;D組,5天時(shí)心肌結(jié)構(gòu)尚完整、細(xì)胞間隙稍增大、有明顯組織出血,10天時(shí)心肌結(jié)構(gòu)明顯疏松紊亂、大量炎癥細(xì)胞浸潤;E組,5天時(shí)心肌組織有少量炎癥細(xì)胞浸潤、結(jié)構(gòu)尚完整,10天時(shí)心肌組織結(jié)構(gòu)完整緊密,無顯著炎癥細(xì)胞浸潤;2.心肌組織MDA水平:(1)5天各組中,A組明顯低于B、C、D、E組(P0.05);B組高于C、D、E組(P0.05);C組低于D組(P0.05),高于E組(P0.05);(2)10天各組中,A組低于B、D組(P0.05),A、C、E組三組間比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);C、E組低于B組(P0.05),B、D組間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);5天與10天各個(gè)對應(yīng)組,除A組無明顯差異外,其余各組比較均差異明顯,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05),并且均為10天各組結(jié)果低于5天各組;3.各組GSH-Px結(jié)果比較:5天時(shí),A組高于B組(P㩳0.05),低于C、D、E組(P㩳0.05);B組低于C、D、E組(P㩳0.05);C組高于D但是低于E組(P㩳0.05);10天各組中,各組GSH-Px表達(dá)水平變化和5天各組相似;5天與10天相對應(yīng)各組比較,除假手術(shù)組無明顯差異外,其余各組差異明顯,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05);4.各組ATP酶變化:兩批結(jié)果類似,其中A組低于C、E組(P0.05),但是高于B組(P0.05),A、D組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其中C組高于D組,但是低于E組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);5.免疫組化EGFR表達(dá)水平比較:5天與10天結(jié)果相似,A組低于B、C、D、E組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);B組低于C、D、E組(P0.05);C、D、E組相互比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其中5天與10天相應(yīng)組比較,除假手術(shù)組及單純移植組無明顯差異外,其余各組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);6.Western Blot比較PLC-γ1表達(dá)差異:5天與10天結(jié)果相似,A組低于B、C、D、E組(P0.05);B組低于C、D、E組(P0.05);C、D、E組相互比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);5天和10天各個(gè)對應(yīng)組比較,除假手術(shù)組無差異外,其余均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);7.心肌組織磷酸化PKC表達(dá)水平比較:(1)5天各組中,A組低于C、E組(P0.05),高于B組(P0.05),與D組相比無明顯差異(P0.05);C組高于D組(P0.05),而低于E組(P0.05);(2)10天各組中,A組低于C、E組(P0.05),高于D組(P0.05),與B組比較,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);B組低于C、E組(P0.05),與D組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);C組高于D組(P0.05),但是低于E組(P0.05);8.心肌組織鈣離子測定結(jié)果:各組間結(jié)果相互比較,無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:EPO對于心臟移植術(shù)后心肌缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)效應(yīng),PKC通路可能參與了EPO對心肌保護(hù)的調(diào)控,激活PKC通路有助于保護(hù)作用的發(fā)揮。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R654.2

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5 錢仲h，

本文編號：2568385