【摘要】：目的：探討IL-6對乳腺癌MCF-7細(xì)胞株上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和侵襲遷移的影響,并初步探討其作用機制。方法：1.MTT法檢測不同濃度的IL-6(25、50、100ng/mL)處理組與對照組(Ong/mL)作用于乳腺癌MCF-7細(xì)胞24、48、72h后對細(xì)胞增殖的影響；2.細(xì)胞劃痕實驗觀察經(jīng)不同濃度的IL-6 (25、50、100ng/mL)處理48h后與對照組(Ong/mL)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的體外遷移能力；3.運用Transwell小室侵襲實驗檢測經(jīng)不同濃度的IL-6(25.50.100ng /mL)處理48h后與對照組(Ong/mL)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的侵襲潛能；4.運用RT-PCR法檢測經(jīng)不同濃度的IL-6(25、50、100ng/mL)作用48h后與對照組(Ong/mL)乳腺癌MCF-7細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin、Vimentin及侵襲遷移標(biāo)志物MMP-9的mRNA水平；5. Western blot法檢測經(jīng)不同濃度的IL-6 (25、50、100ng/mL)作用48h后與對照組(Ong/mL)乳腺癌MCF-7細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin、Vimentin及侵襲遷移標(biāo)志物MMP-9的蛋白表達(dá)水平。6.采用免疫組織化學(xué)法檢測入組乳腺癌患者腫瘤組織與癌旁正常組織內(nèi)IL-6及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin、Vimentin的表達(dá)。結(jié)果：1.經(jīng)不同濃度的IL-6 (25、50、100ng/mL)處理組的OD(490)值比對照組(0ng/mL)均有增加,且伴隨IL-6濃度的增大與作用時間的延長,表現(xiàn)出量效-時效關(guān)系(P0.05)。2.經(jīng)不同濃度的IL-6(25、50、100ng/ml)處理48h后乳腺癌MCF-7細(xì)胞的遷移距離分別為(18.97±0.31)、(.93±0.25)和(29.30±0.46)mm,而對照組(0 ng/mL)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的遷移距離為(15.20±0.40)mm。不同濃度IL-6(25.50.100 ng/mL)處理組中乳腺癌MCF-7細(xì)胞遷移距離較對照組(0 ng/mL)中乳腺癌MCF-7細(xì)胞遷移距離明顯增加,且隨IL-6濃度增大,乳腺癌MCF-7細(xì)胞遷移距離增加,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3.經(jīng)不同濃度的IL-6(25.50.100ng/mL)處理48h后穿過Matrigel膠的MCF-7細(xì)胞數(shù)分別為(43.00±3.61)、(68.00±3.00)和(84.33±2.52)個,而對照組(0 ng/mL)中穿過Matrigel膠的MCF-7細(xì)胞數(shù)為(28.00±2.65)個。不同濃度IL-6(25.50.100 ng/mL)處理組中穿過Matrigel膠的MCF-7細(xì)胞數(shù)量較對照組(0 ng/mL)中穿過Matrigel膠的MCF-7細(xì)胞數(shù)量明顯增多,且隨IL-6濃度增大,穿過Matrigel膠的MCF-7細(xì)胞數(shù)量越多,有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。4.經(jīng)不同濃度的IL-6(25.50.100ng/mL)處理48h后,IL-6處理組中E-cadherin mRNA的相對表達(dá)量分別為0.76±0.074、0.52±0.087和0.45±0.048；Vimentin mRNA的相對表達(dá)量分別為1.15±0.111、2.71±0.096和3.11±0.200；MMP.9 mRNA的相對表達(dá)量分別為1.23±0.039、2.25±0.170和3.59±0.261。與對照組(0ng/mL)相比較,經(jīng)不同濃度IL-6處理后的乳腺癌MCF-7細(xì)胞中E-cadherin mRNA表達(dá)均降低(P0.05),而Vimentin和MMP-9 mRNA表達(dá)增高(P0.05)。5.經(jīng)不同濃度的IL-6(25.50.100ng/mL)處理48h后,IL-6處理組中E-cadherin蛋白的相對表達(dá)量分別為3.45±0.340、2.58±0.141和2.04±0.172:Vimentin蛋白的相對表達(dá)量分別為2.08±0.121、2.46±0.068和3.22±0.520；MMP-9蛋白的相對表達(dá)量分別為1.03±0.214、1.90±0.145和2.22±0.191。與對照組(Ong/mL)相比較,經(jīng)不同濃度IL-6處理后的乳腺癌MCF-7細(xì)胞中E-cadherin蛋白表達(dá)均降低(P0.05),而Vimentin和MMP-9蛋白表達(dá)均增高(P0.05)。6. IL-6、E-cadherin、Vimentin在乳腺癌組織中表達(dá)高于癌旁正常組織；IL-6、E-cadherin、Vimentin均與腫瘤大小、TNM分期、組織學(xué)分級、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR密切相關(guān)(P0.05),均與年齡及絕經(jīng)與否無關(guān)(P0.05)。有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、TNM分期高、組織學(xué)級別高、ER、PR陰性表達(dá)的乳腺癌患者的癌細(xì)胞內(nèi)IL-6、Vimentin陽性表達(dá)率增高,E-cadherin陽性表達(dá)率降低(P0.05)。結(jié)論：在細(xì)胞形態(tài)變化以及相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上證明,IL-6能夠誘導(dǎo)乳腺癌發(fā)生EMT,并促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞體外增殖和侵襲遷移。
【圖文】：

圖３－１邋：對照組與ＩＬ－６處理后ＭＣＦ－７細(xì)胞形態(tài)Ｘ４０邋逡逑

？‘邐}0胞劃痕實驗結(jié)果如圖３－２、圖３－３所示。經(jīng)不同濃度的比７６邋（２５、邋，逡逑５０、ｌＯＯｎｇ／ｍｌ）處理４８ｈ后s侔停茫疲廢赴那ㄒ憑嗬敕直鷂ǎ保福梗峰義，

本文編號：2559228