【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立小鼠肝臟全肝阻斷缺血再灌注損傷(IRI)模型,檢測(cè)微管蛋白折疊輔助因子B(TBCB)在小鼠肝臟缺血再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá),探討TBCB在小鼠全肝缺血再灌注損傷中的作用及其關(guān)系。方法:1、采用小鼠全肝阻斷缺血再灌注損傷模型,我們選取的健康C57小鼠60只被隨機(jī)分為對(duì)照組7只、缺血再灌注組42只;缺血再灌注組,每組通過(guò)夾閉小鼠肝門,缺血30分鐘,再按不同灌注時(shí)限(2、4、6、8、12、24h)分為6個(gè)亞組,每個(gè)亞組7只,構(gòu)建小鼠全肝阻斷缺血再灌注損傷模型;分別于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后留取小鼠血液及肝臟組織。2、首先選用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中ALT、AST水平,了解肝功能的表達(dá)情況,用ELISA檢測(cè)血清中IL-6、TNF-α表達(dá)水平。3、應(yīng)用HE染色觀察肝臟的形態(tài)學(xué)改變。以及采用Western Blot和免疫組織化學(xué)的方法,檢測(cè)缺血再灌注各個(gè)時(shí)間點(diǎn)肝組織中TBCB蛋白、IL-6、TNF-α的表達(dá)變化。4、Real-Time PCR檢測(cè)對(duì)照組及缺血再灌注組,各個(gè)時(shí)間點(diǎn)小鼠肝臟組織TBCB因子的mRNA表達(dá)和變化。結(jié)果:1、全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中ALT、AST樣本中,以及ELISA檢測(cè)血清中IL-6、TNF-α表達(dá)水平,與對(duì)照組比較,缺血再灌注組中的AST、ALT、IL-6、TNF-α表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,且在再灌注的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)中,12 h最高;與對(duì)照組比較,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、HE染色觀察肝臟的形態(tài)學(xué)改變上,在我們發(fā)現(xiàn)缺血再灌注組與對(duì)照組比較,肝臟形態(tài)學(xué)明顯改變,尤其在缺血再灌注后12 h,肝細(xì)胞變性、壞死明顯,肝索結(jié)構(gòu)消失,部分肝細(xì)胞灶狀壞死。3、IHC檢測(cè)對(duì)照組及缺血再灌注組的TBCB、IL-6、TNF-α蛋白的表達(dá)水平情況,結(jié)果顯示:缺血再灌注組TBCB、IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)應(yīng)的對(duì)照組,且缺血再灌注組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)存在差異性,TBCB、IL-6、TNF-α蛋白的表達(dá)在12 h達(dá)到高峰。4、Real-Time PCR和Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示:TBCB基因及TBCB蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)應(yīng)的對(duì)照組,并且在缺血再灌注組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)中,12h變化最明顯。5、相關(guān)性分析結(jié)果顯示:在小鼠肝臟缺血再灌注中TBCB蛋白水平的表達(dá)與TNF-α,IL-6蛋白水平與呈一定的關(guān)聯(lián)性(P0.05)。結(jié)論:1、通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以看出,在基因水平和蛋白水平,在缺血再灌注損傷中肝臟組織TBCB表達(dá)水平顯著高于假手術(shù)組,具有相同的趨勢(shì),表明TBCB可能是參與肝臟缺血再灌注損傷的一個(gè)靶點(diǎn),并發(fā)揮重要作用。2、我們的研究顯示TBCB在缺血再灌注損傷中表達(dá)水平,與IL-6、TNF-α在小鼠肝臟缺血再灌注表達(dá),呈一定的關(guān)聯(lián)性,TBCB與IL-6、TNF-α共同在肝臟缺血再灌注中肝臟的損傷的發(fā)生中起到關(guān)鍵作用。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R657.3

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2552985