【摘要】：目的:本實驗通過建立小鼠肝臟全肝阻斷缺血再灌注損傷(IRI)模型,檢測微管蛋白折疊輔助因子B(TBCB)在小鼠肝臟缺血再灌注后不同時間點的表達,探討TBCB在小鼠全肝缺血再灌注損傷中的作用及其關系。方法:1、采用小鼠全肝阻斷缺血再灌注損傷模型,我們選取的健康C57小鼠60只被隨機分為對照組7只、缺血再灌注組42只;缺血再灌注組,每組通過夾閉小鼠肝門,缺血30分鐘,再按不同灌注時限(2、4、6、8、12、24h)分為6個亞組,每個亞組7只,構建小鼠全肝阻斷缺血再灌注損傷模型;分別于實驗結束后留取小鼠血液及肝臟組織。2、首先選用全自動生化分析儀檢測血清中ALT、AST水平,了解肝功能的表達情況,用ELISA檢測血清中IL-6、TNF-α表達水平。3、應用HE染色觀察肝臟的形態(tài)學改變。以及采用Western Blot和免疫組織化學的方法,檢測缺血再灌注各個時間點肝組織中TBCB蛋白、IL-6、TNF-α的表達變化。4、Real-Time PCR檢測對照組及缺血再灌注組,各個時間點小鼠肝臟組織TBCB因子的mRNA表達和變化。結果:1、全自動生化分析儀檢測血清中ALT、AST樣本中,以及ELISA檢測血清中IL-6、TNF-α表達水平,與對照組比較,缺血再灌注組中的AST、ALT、IL-6、TNF-α表達水平明顯高于對照組,且在再灌注的各個時間點中,12 h最高;與對照組比較,具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2、HE染色觀察肝臟的形態(tài)學改變上,在我們發(fā)現(xiàn)缺血再灌注組與對照組比較,肝臟形態(tài)學明顯改變,尤其在缺血再灌注后12 h,肝細胞變性、壞死明顯,肝索結構消失,部分肝細胞灶狀壞死。3、IHC檢測對照組及缺血再灌注組的TBCB、IL-6、TNF-α蛋白的表達水平情況,結果顯示:缺血再灌注組TBCB、IL-6、TNF-α蛋白表達水平明顯高于對應的對照組,且缺血再灌注組各個時間點的表達存在差異性,TBCB、IL-6、TNF-α蛋白的表達在12 h達到高峰。4、Real-Time PCR和Western Blot檢測結果顯示:TBCB基因及TBCB蛋白表達水平明顯高于對應的對照組,并且在缺血再灌注組各個時間點中,12h變化最明顯。5、相關性分析結果顯示:在小鼠肝臟缺血再灌注中TBCB蛋白水平的表達與TNF-α,IL-6蛋白水平與呈一定的關聯(lián)性(P0.05)。結論:1、通過實驗可以看出,在基因水平和蛋白水平,在缺血再灌注損傷中肝臟組織TBCB表達水平顯著高于假手術組,具有相同的趨勢,表明TBCB可能是參與肝臟缺血再灌注損傷的一個靶點,并發(fā)揮重要作用。2、我們的研究顯示TBCB在缺血再灌注損傷中表達水平,與IL-6、TNF-α在小鼠肝臟缺血再灌注表達,呈一定的關聯(lián)性,TBCB與IL-6、TNF-α共同在肝臟缺血再灌注中肝臟的損傷的發(fā)生中起到關鍵作用。
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R657.3

【參考文獻】

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本文編號：2552985