【摘要】：目的探討超順磁氧化鐵(SPIO)納米微粒對SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)成軟骨分化的影響并探討背后可能的機制。方法體外培養(yǎng)SD大鼠BMSCs,Caspase-8比色測定工具包(CCK8法)檢測SPIO(1和5μg/m L)對BMSCs細胞毒性;SPIO(1和5μg/m L)與成軟骨培養(yǎng)基混合培養(yǎng)9 d,普魯士藍染色和自發(fā)熒光檢測驗證SPIO與BMSCs結(jié)合情況;熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測成軟骨相關(guān)因子mRNA的表達量,如:二型膠原α2、聚集蛋白聚糖、基質(zhì)金屬蛋白酶13;體外行阿利新藍染色及二型膠原α2免疫熒光染色檢測BMSCs成軟骨量;Western blot檢測軟骨標記蛋白二型膠原α2,聚集蛋白聚糖和基質(zhì)金屬蛋白酶13表達量以及Ihh/PTHr P信號通路蛋白Ihh、PTHr P表達量明確機制。結(jié)果體外CCK8法檢測提示SPIO(1和5μg/m L)對BMSCs細胞活性無影響,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測二型膠原α2和聚集蛋白聚糖的mRNA表達提示,和對照組(單純加入溶劑)相比,1μg/m L SPIO的mRNA量明顯增加,5μg/m L SPIO的mRNA量大于1μg/m L SPIO,基質(zhì)金屬蛋白酶13的mRNA表達出現(xiàn)濃度依賴抑制,和對照組相比1μg/m L SPIO表達減少,5μg/m L SPIO的mRNA量小于1μg/m L SPIO;體外阿利新藍染色和二型膠原α2免疫熒光染色提示陽性細胞隨著SPIO濃度增加而增加,且均大于對照組(P0.05);蛋白免疫印跡提示二型膠原α2和聚集蛋白聚糖蛋白表達隨SPIO升高而升高,且均大于對照組,但基質(zhì)金屬蛋白酶13表達量隨SPIO升高而降低,且均小于對照組,Ihh和PTHr P蛋白表達量隨SPIO濃度增加而升高,且均大于對照組(P0.05)。SPIO促進Ihh/PTHr P信號通路,除CCK8法檢測結(jié)果外均出現(xiàn)濃度依賴性。結(jié)論超順磁氧化鐵納米微粒在體外實驗促進BMSCs向軟骨細胞分化,并上調(diào)Ihh/PTHr P信號通路,為治療軟骨退變相關(guān)疾病提供可能的治療手段。
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圖片說明：BMSCs攝取SPIO實驗
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圖片說明： 度值明顯增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，圖4E和F），提示SPIO促進Ihh/PTHrP信號通路活性。CKC8AVluea1.81.61.41.21.00.80.60.40.20015SPIO(μg/mL)n=6RNAmevelfoMPM31Fold(hange)c1.21.00.80.60.40.20015SPIO(μg/mL)*#n=6RNAmevelfoOLC2α2Fold(hange)c2.52.01.51.00.50015SPIO(μg/mL)*#n=6RNAmevelfogrecanaFold(hange)c2.52.01.51.00.50015SPIO(μg/mL)*#n=6ABCD圖2SPIO對軟骨相關(guān)基因表達的影響Fig.2EffectofSPIOonmRNAexpressionsofchondrocytemarkergenes.A:CCK8assayofBMSCsculturedwithSPIO(1and5μg/mL)for2days;B,C,D:Q-PCRfordetectingCOL2α2,MMP13andaggrecanmRNAs,respectively,inBMSCsculturedwithSPIO(1and5μg/mL)for2days.DataareshownasMean±SD.*P<0.05,#P<0.05.·655·
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院影像科;中國科學(xué)院深圳先進技術(shù)研究院;中山大學(xué)第五附屬醫(yī)院放射科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81471810)~~
【分類號】：R684

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1 夏鷹;江澄川;楊林;姜保東;丁忠良;汪洋;;超順磁氧化鐵標記中腦神經(jīng)干細胞移植治療帕金森的實驗研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會首屆全國代表大會論文匯編[C];2005年

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本文編號：2513848