【摘要】：背景哮喘是一種病因復雜的慢性氣道炎癥性疾病,其發(fā)病涉及到多種不同的炎性細胞以及細胞組分,主要臨床病理特征包括不同程度的氣道慢性炎癥,氣道高反應性,粘液高分泌以及氣道重塑。七氟醚(SEV)是臨床常用的吸入麻醉藥,已報道七氟醚可以緩解哮喘危重患者的臨床癥狀,其確切機制尚待進一步探討。水通道蛋白5(AQP5)主要表達于肺組織,是一類在維持肺組織水代謝平衡方面具有重要作用的通道蛋白。研究已表明,氣道的炎癥狀態(tài)能夠改變肺組織AQP5的表達水平。本研究擬以卵清蛋白(OVA)致敏和激發(fā)建立的急性哮喘小鼠為模型,研究七氟醚對哮喘小鼠氣道炎癥的影響及AQP5在其中的作用。方法1.急性哮喘小鼠模型的建立取24只SPF級C57BL/6小鼠,雌性,體重23~27g,6~8周齡。采用隨機數(shù)字表法分成3組(n=8):對照組、哮喘組以及七氟醚組。哮喘組于造模第0天開始致敏:10μg的卵清蛋白和1 mg的硫酸鋁鉀溶于0.5 ml的生理鹽水溶液中,注入小鼠腹腔。于造模第14天開始激發(fā):采用超聲霧化儀連續(xù)7d重復吸入50 ml 1%卵清蛋白生理鹽水溶液50 ml,每次吸入0.5h。七氟醚組造模方法同上,每次激發(fā)前吸入濃度為3%的七氟醚,吸入時間為1 h。對照組于造模第0天腹腔內(nèi)注射0.5 ml含有硫酸鋁鉀1 mg的生理鹽水溶液,在第14天開始,連續(xù)7天重復霧化吸入0.9%生理鹽水50 ml,每天1次,每次0.5h。2.氣道炎癥反應的檢測于造模第21天即末次激發(fā)后24 h,行支氣管肺泡灌洗,回收灌洗液,計數(shù)肺泡灌洗液(BALF)中炎性細胞總數(shù),然后分類計數(shù)各種炎性細胞,采用ELISA法測定BALF中炎性介質(zhì)TNF-α、IL-13和IL-10濃度。取適量肺組織切片,HE染色,PAS染色,觀察肺組織炎性細胞的浸潤情況、支氣管上皮和肺泡結構損傷情況,粘液分泌情況。3.AQP5蛋白表達的檢測采用免疫組織化學法,Western blot方法檢測肺組織AQP5蛋白表達的水平結果1.急性哮喘小鼠模型的建立。與對照組相比,哮喘組小鼠行為學上出現(xiàn)大小便增多,煩躁不安,呼吸急促等改變。組織病理學及分子生物檢測顯示,哮喘組小鼠肺組織中肺泡壁結構被破壞,大量的炎性細胞浸潤在血管和支氣管周圍,氣管壁增厚明顯,上皮細胞壞死,粘液分泌增加;哮喘組小鼠BALF中的炎性細胞總數(shù)及各炎性細胞的分類計數(shù),白細胞介素13(IL-13),腫瘤壞死因子α(TNF-α)含量增加(P0.05),白細胞介素10(IL-10)含量增加(P0.05)。2.七氟醚抑制哮喘小鼠的氣道炎癥。與哮喘組小鼠相比,七氟醚組小鼠肺組織結構破壞明顯減輕,炎性細胞的浸潤數(shù)目及粘液分泌量明顯減少,BALF中炎性細胞總數(shù)及各炎性細胞的分類計數(shù)明顯減少,細胞因子TNF-α,IL-13表達水平降低,IL-10表達水平明顯增加(P0.05)。3.七氟醚上調(diào)哮喘小鼠的肺組織AQP5蛋白表達量。與對照組相比,哮喘組小鼠AQP5蛋白表達量顯著減少;與哮喘組相比,七氟醚組小鼠AQP5蛋白的表達量明顯增加(P0.05)。結論七氟醚能夠抑制哮喘小鼠的氣道炎癥,其對氣道炎癥的抑制作用可能是通過上調(diào)AQP5蛋白表達量實現(xiàn)。
[Abstract]:Background asthma is a complicated and complicated chronic airway inflammatory disease, which is involved in many different inflammatory cells and cellular components. The main clinical and pathological features include airway chronic inflammation, airway hyperresponsiveness, mucus hypersecretion, and airway remodeling. Sevoflurane (SEV) is a commonly used inhalation anesthetic, and it has been reported that sevoflurane can alleviate the clinical symptoms of critically ill patients with asthma. The exact mechanism of sevoflurane has yet to be further explored. Aquaporin 5 (AQP5) is mainly expressed in lung tissue, and is a kind of channel protein which plays an important role in maintaining the balance of water metabolism of lung tissue. The study has shown that the inflammatory state of the airway can change the expression level of AQP5 in the lung tissue. The effect of sevoflurane on airway inflammation in asthmatic mice and the role of AQP5 were studied in this study. Method 1. The model of acute asthma mice was established in 24 SPF C57BL/6 mice, female, body weight 23-27 g,6-8 weeks old. In the control group, the asthma group and the sevoflurane group were divided into three groups (n = 8). In the asthma group, the sensitization was started on the first day of the model:10. mu. g of ovalbumin and 1 mg of potassium sulfate were dissolved in 0.5 ml of physiological saline solution and injected into the abdominal cavity of the mice. Excitation was started on the 14th day of the model:50 ml of 1% ovalbumin physiological saline solution was taken in 50 ml for 7 days by means of an ultrasonic atomizer and 0.5 h for each time. The model of the sevoflurane group was the same as the above, and the inhalation time was 1 hour. The control group injected 0.5 ml of the saline solution containing 1 mg of potassium sulfate in the abdominal cavity of the day 0 of the model, and started on the 14th day. The inhalation of 0.9% normal saline (50 ml) was repeated for 7 consecutive days, and once a day, 0.5 h each time. The number of inflammatory cells in BALF was measured by bronchoalveolar lavage, recovery and irrigation, and the total number of inflammatory cells in the alveolar lavage fluid (BALF) was counted, and the inflammatory mediators in BALF were determined by ELISA. IL-13 and IL-10 concentrations. An appropriate amount of the lung tissue sections, HE staining, PAS staining, the infiltration of inflammatory cells in the lung tissue, the damage of the bronchial epithelium and the alveolar structure, and the mucus secretion were observed. The expression of AQP5 in lung tissue was detected by Western blot. Establishment of a mouse model for acute asthma. Compared with the control group, the behavior of the mouse behavior of the asthma group was increased, the restlessness, the shortness of breath, and so on. Histopathology and molecular biological tests showed that the structure of the alveolar wall in the lung tissue of the asthma group was destroyed, and a large amount of inflammatory cells were infiltrated around the blood vessel and the bronchi, the wall of the air tube was increased in thickness, the epithelial cells were necrotic and the secretion of mucus increased. The total number of inflammatory cells in BALF of asthmatic group and the number of inflammatory cells, interleukin-13 (IL-13), tumor necrosis factor (TNF-1) content increased (P0.05), and the content of interleukin-10 (IL-10) was increased (P0.05). Sevoflurane inhibits airway inflammation in asthma mice. Compared with the asthma group, the damage of the lung tissue in the sevoflurane group was significantly reduced, the number of infiltration of the inflammatory cells and the amount of mucus secretion were significantly reduced, the total number of inflammatory cells in the BALF and the number of the inflammatory cells were significantly reduced, and the level of the expression of the cytokines TNF-1 and IL-13 decreased. The level of IL-10 expression was significantly increased (P0.05). The expression of AQP5 in the lung of asthmatic mice was increased by sevoflurane. Compared with the control group, the expression of AQP5 in the asthmatic group was significantly decreased, and the expression of AQP5 in the sevoflurane group was significantly increased compared with the control group (P0.05). Conclusion Sevoflurane can inhibit the airway inflammation of asthmatic mice, and its inhibitory effect on airway inflammation may be achieved by up-regulating the expression of AQP5.
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R614

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本文編號：2498345