【摘要】：目的本研究擬觀察大鼠嚴重燙傷后,胰島β細胞分泌與合成胰島素的變化,并探討長效GLP-1類似物Exendin-4對大鼠胰島β細胞功能的調(diào)節(jié)作用。方法將72只8-周齡雄性SPF級Wistar大鼠按照隨機數(shù)字表法分為假傷組、假傷+Exendin-4治療組(假傷治療組)、燙傷組、燙傷+Exendin-4治療組(燙傷治療組)等4組,每組18只動物。將燙傷組、燙傷治療組大鼠在94 ℃熱水中,背部浸浴12 s,腹部浸浴6s,模擬50% TBSA Ⅲ°燙傷模型;假傷組、假傷治療組大鼠在37℃溫水中浸浴以模擬假傷模型。假傷治療組、燙傷治療組大鼠傷后立即經(jīng)皮下注射Exendin-4(4 μg/kg),2/日;假傷組、燙傷組大鼠皮下注射等量的滅菌注射用水。各組大鼠于傷后72 h進行實驗:剪尾法取血測空腹血糖,采集腹主動脈血分離血漿、血清,化學(xué)發(fā)光法測定血漿GLP-1、ELISA法測定血清胰島素水平,并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR);膠原酶V灌注法消化分離胰腺、Ficoll 400濃度梯度離心法對大鼠胰島進行純化,胰島經(jīng)短暫的適應(yīng)性培養(yǎng)后,給予含不同濃度葡萄糖(2.8 mmol/L或16.7mmol/L)的RPMI 1640培養(yǎng)基刺激不同時間(1 h或24h) , ELISA法檢測培養(yǎng)上清液中胰島素含量,Western blot法檢測胰島內(nèi)剩余胰島素以及胰島素原含量,Real-time PCR法檢測細胞內(nèi)前胰島素原(preproinsulin) mRNA表達水平的變化;電鏡觀察胰島p細胞內(nèi)IGs分布情況及胰島素空泡數(shù)量。對實驗數(shù)據(jù)進行方差分析、析因設(shè)計方差分析及LSD-t檢驗。結(jié)果1.大鼠空腹血糖濃度變化燙傷組大鼠空腹血糖水平明顯高于假傷組、假傷治療組;燙傷治療組大鼠空腹血糖水平顯著低于燙傷組。2.血清胰島素濃度、胰島素抵抗指數(shù)變化燙傷組、燙傷治療組大鼠血清胰島素濃度顯著高于假傷組、假傷治療組;燙傷治療組大鼠血清胰島素濃度與燙傷組相比明顯升高。燙傷組、燙傷治療組大鼠HOMA-IR與假傷組、假傷治療組比較顯著升高;燙傷治療組大鼠HOMA-IR與燙傷組相比明顯降低。3.血漿GLP-1濃度變化與假傷組比較,燙傷組、燙傷治療組大鼠血漿GLP-1濃度顯著降低;與燙傷組相比,燙傷治療組大鼠血漿GLP-1濃度明顯升高。4.胰島胰島素分泌功能變化各組胰島給予16.7 mmol/L葡萄糖刺激lh后,燙傷組大鼠單位時間內(nèi)胰島素分泌量顯著低于假傷治療組;與燙傷組相比,燙傷治療組大鼠胰島單位時間內(nèi)胰島素分泌量明顯增加。當(dāng)各組胰島給予16.7 mmol/L葡萄糖刺激24 h后,與假傷組比較,燙傷組大鼠胰島單位時間內(nèi)胰島素分泌量明顯減少;與燙傷組比較,燙傷治療組大鼠胰島單位時間內(nèi)胰島素分泌量顯著增加。5.大鼠胰島內(nèi)胰島素含量的變化給予2.8 mmol/L葡萄糖刺激1h后,與假傷組比較,燙傷組、燙傷治療組大鼠胰島內(nèi)胰島素含量顯著降低。當(dāng)各組胰島給予16.7 mmol/L葡萄糖刺激1 h后,與假傷組相比,燙傷組、燙傷治療組大鼠胰島內(nèi)胰島素含量顯著降低。當(dāng)各組胰島給予2.8 mmol/L葡萄糖刺激24 h,與假傷組比較,燙傷組大鼠胰島內(nèi)胰島素含量明顯降低。當(dāng)各組胰島給予16.7 mmol/L葡萄糖刺激24h后,與假傷組比較,燙傷組、燙傷治療組大鼠胰島內(nèi)胰島素含量明顯降低;與燙傷組比較,燙傷治療組大鼠胰島內(nèi)胰島素含量明顯增加。6.大鼠胰島內(nèi)胰島素原含量的變化各組胰島給予2.8 mmol/L葡萄糖刺激1 h后,與假傷組比較,假傷治療組大鼠胰島內(nèi)胰島素原的含量顯著增加;與燙傷組比較,燙傷治療組大鼠胰島內(nèi)胰島素原的含量顯著增加。當(dāng)各組胰島給予16.7 mmol/L葡萄糖刺激1h后,與假傷組比較,燙傷組大鼠胰島內(nèi)胰島素原的含量顯著減少,燙傷治療組大鼠胰島內(nèi)胰島素原的含量顯著增加;與燙傷組比較,燙傷治療組大鼠胰島內(nèi)胰島素原的含量顯著增加。當(dāng)各組胰島給予2.8 mmol/L葡萄糖刺激24 h后,與假傷組比較,燙傷組大鼠胰島內(nèi)胰島素原含量顯著減少;與燙傷組比較,燙傷治療組胰島內(nèi)胰島素原含量顯著增加。當(dāng)各組胰島給予16.7 mmol/L葡萄糖刺激24 h,與假傷組比較,燙傷組大鼠內(nèi)胰島素原含量顯著減少;與燙傷組比較,燙傷治療組大鼠內(nèi)胰島素原含量顯著增加。7.大鼠胰島內(nèi)胰島素基因表達的變化當(dāng)各組胰島給予16.7 mmol/L葡萄糖刺激24 h后,與假傷組比較,假傷治療組大鼠胰島內(nèi)preproinsulin mRNA的表達量明顯增加,燙傷組大鼠胰島內(nèi)preproinsulin mRNA的表達量明顯減少;與燙傷組比較,燙傷治療組大鼠胰島內(nèi)preproinsulin mRNA的表達量明顯增加。8.胰島素顆粒分布情況與假傷組、假傷治療組比較,燙傷組大鼠胰島β細胞內(nèi)每平方微米所含胰島素核心顆粒的數(shù)量顯著減少;與燙傷組比較,燙傷治療組大鼠胰島β細胞內(nèi)每平方微米所含胰島素核心顆粒的數(shù)量顯著增加。與燙傷治療組比較,假傷組與燙傷組大鼠胰島β細胞內(nèi)每微米細胞膜上附著的胰島素顆粒的數(shù)量顯著減少。結(jié)論1.嚴重燙傷后,大鼠體重顯著減輕,血漿GLP-1濃度明顯降低,空腹血糖濃度和胰島素濃度明顯升高,機體胰島素抵抗指數(shù)顯著升高。2.嚴重燙傷后,胰島β細胞胰島素分泌、細胞內(nèi)胰島素儲備、胰島素合成能力均明顯下降,β細胞內(nèi)與細胞膜錨接的胰島素分泌顆粒顯著減少。3.補充長效GLP-1類似物Exendin-4能促進胰島素mRNA的表達,增加β細胞內(nèi)胰島素的合成、儲備以及胰島素分泌顆粒與β細胞細胞膜的錨接,進而促進燙傷大鼠β細胞胰島素的分泌,并能抑制β細胞的凋亡,從而增加血清中胰島素水平并達到降低血糖的目的。
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【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R644

【參考文獻】

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本文編號：2432097