【摘要】：研究背景增生性瘢痕是皮膚創(chuàng)傷愈合后的常見并發(fā)癥,多見于創(chuàng)傷和燒傷創(chuàng)面,成纖維細(xì)胞的大量增殖和細(xì)胞外基質(zhì)特別是膠原蛋白的異常沉積在增生性瘢痕的發(fā)生發(fā)展起重要作用。增生性瘢痕的不僅影響外觀,可能導(dǎo)致無汗、瘙癢、感覺異常等不適,甚至?xí)痍P(guān)節(jié)痙攣、肢體畸形,影響患者身心健康及社會功能。因此,如何抑制瘢痕的生長、減少瘢痕的形成一直是臨床治療關(guān)注的重點(diǎn)。遺憾的是,迄今為止,對于增生性瘢痕的形成機(jī)制仍未明確,臨床上也缺乏確切的治療方法。近年來,隨著對病理性瘢痕機(jī)制研究的不斷深入,我們認(rèn)識到瘢痕的發(fā)生可能與原癌基因(如Bcl-2,Smad,c-myc)過表達(dá)使成纖維細(xì)胞增殖增多及抑癌基因(如p53,Fas,RUNX3,p27)突變使成纖維細(xì)胞凋亡減少有關(guān),使成纖維細(xì)胞數(shù)目增多,膠原蛋白分泌旺盛。原癌基因c-myc的表達(dá)與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān),在調(diào)控細(xì)胞增殖分化起重要作用,在增殖期細(xì)胞中表達(dá)較高,在靜止期或分化期細(xì)胞中表達(dá)較低。FBP1是c-myc的一個(gè)遠(yuǎn)端上游元件結(jié)合蛋白(the far upstream element binging protein1,FBP),是 DNA 結(jié)合蛋白家族中的一員,參與調(diào)控c-myc在細(xì)胞中的表達(dá)。當(dāng)c-myc被廢除,遠(yuǎn)端的上游調(diào)控元件則不再受支持。相反,反FBPRNA中遠(yuǎn)端上游調(diào)控元件的單調(diào)性降低與內(nèi)源性c-myc基因表達(dá)的下調(diào)相關(guān)。研究表明適量的FBP有利于c-myc的表達(dá),當(dāng)缺乏FBP時(shí)內(nèi)源性c-myc的表達(dá)不能被維持。增生性瘢痕在組織學(xué)上表現(xiàn)為成纖維細(xì)胞的大量增殖及細(xì)胞外基質(zhì)尤其是膠原蛋白的異常沉積,在一定程度上與腫瘤發(fā)生發(fā)展相似。已有研究表明原癌基因c-myc可促進(jìn)增生性瘢痕中成纖維細(xì)胞的增殖,而FBP1參與調(diào)控c-myc在細(xì)胞中的表達(dá)。既往對FBP1的研究主要集中在腫瘤組織中,發(fā)現(xiàn)FBP1在腫瘤組織中高表達(dá),尚無相關(guān)研究探索FBP1在瘢痕組織中的表達(dá)情況。因此,本文探索FBP1在人增生性瘢痕中的表達(dá)及其對成纖維細(xì)胞增殖、凋亡及膠原表達(dá)方面的影響。實(shí)驗(yàn)材料和方法在無菌條件下收集新鮮的正常皮膚、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩標(biāo)本,4℃C保存,4小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將同一份標(biāo)本分成三部分處理:一部分標(biāo)本固定后進(jìn)行石蠟包埋、切片,檢測正常皮膚和增生性瘢痕在組織學(xué)上的差異,檢測FBP1在正常皮膚和增生性瘢痕的表達(dá);一部分組織塊用于提取蛋白,檢測正常皮膚和增生性瘢痕中FBP1的表達(dá)差異;一部分組織用于成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)及傳代,α-SMA免疫熒光鑒定增生性瘢痕成纖維細(xì)胞。取第2-6代增生性瘢痕成纖維細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),將實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組,對實(shí)驗(yàn)組成纖維細(xì)胞加入siFBP1進(jìn)行轉(zhuǎn)染以降低成纖維細(xì)胞中FBP1的表達(dá),對照組不加入siFBP1。收集實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞,采用qRT-PCR法檢測siFBP1效用,MTT法檢測siFBP1對成纖維細(xì)胞的增殖能力的影響、流式細(xì)胞術(shù)(PI單染色法)檢測siFBP1對細(xì)胞周期的影響、TUNEL染色法檢測siFBP1對細(xì)胞凋亡的影響、Western Blotting檢測siFBP1對成纖維細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果FBP1在增生性瘢痕中表達(dá)高于正常皮膚,在增生性瘢痕來源的成纖維細(xì)胞中的表達(dá)也高于正常皮膚來源的成纖維細(xì)胞。siFBP1能有效降低增生性瘢痕中成纖維細(xì)胞中FBP1表達(dá),抑制增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖(P0.01),使細(xì)胞周期阻滯于S期(P0.01)。TUNEL染色未顯示siFBP1對成纖維細(xì)胞凋亡有明顯影響,但蛋白印跡結(jié)果顯示siFBP1減少增生性瘢痕成纖維細(xì)胞c-myc、collagen Ⅰ、collagenⅢ、caspase3 和 caspase9 的表達(dá)。結(jié)論FBP1在增生性瘢痕成纖維細(xì)胞中高表達(dá),促進(jìn)c-myc表達(dá),促進(jìn)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的增殖、凋亡和膠原蛋白表達(dá)。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R622

【參考文獻(xiàn)】

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1 李子虎;呂大倫;;增生性瘢痕的發(fā)生機(jī)制及治療進(jìn)展[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年04期

2 金哲虎;;瘢痕疙瘩的成因及治療新進(jìn)展[J];中國醫(yī)學(xué)文摘(皮膚科學(xué));2015年01期

3 李曉丹;劉偉;;瘢痕疙瘩術(shù)后放射治療進(jìn)展[J];江西醫(yī)藥;2013年05期

4 郭雷洋;曹莫;;瘢痕疙瘩發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國美容醫(yī)學(xué);2012年11期

5 寇鵬勇;高志勇;;5-氟尿嘧啶與糖皮質(zhì)激素聯(lián)合治療瘢痕疙瘩的臨床體會[J];中國藥物與臨床;2012年07期

6 楊晶;王娟;王家璧;;Cynergy激光聯(lián)合復(fù)方倍他米松注射液治療瘢痕疙瘩臨床觀察[J];中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志;2012年01期

7 鄭輝;成羿;;病理性瘢痕組織的發(fā)生機(jī)制研究進(jìn)展[J];浙江臨床醫(yī)學(xué);2012年01期

8 白忠;呂操;牛霞;郭建宙;;YAG激光綜合治療耳廓瘢痕疙瘩[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2010年22期

9 呂大倫;端龍勝;陳禮新;劉雯蓓;季必華;;轉(zhuǎn)化生長因子-β及其受體在不同時(shí)期增生性瘢痕組織中的表達(dá)[J];皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年03期

10 龐久玲;馬征;劉軍;劉愛東;;Smad3和轉(zhuǎn)化生長因子β1在瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮膚中的表達(dá):48∶40∶40例標(biāo)本病理檢測[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年11期

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本文編號：2431035