【摘要】：目的：觀察隔日限食療法(every-other-day fasting, EODF)對大鼠急性脊髓損傷(acute spinal cord injury,ASCI)后運(yùn)動功能、脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡、炎性因子及血清炎性因子的影響,了解神經(jīng)細(xì)胞凋亡、炎性反應(yīng)和運(yùn)動功能恢復(fù)之間的關(guān)系,從抗凋亡、抗炎方面初步探討EODF對ASCI的神經(jīng)保護(hù)作用及其可能機(jī)制。為EODF用于臨床治療ASCI提供實驗依據(jù)。方法：將48只雌性成年Wistar大鼠,隨機(jī)分成EODF組(A組,n=16)、正常飲食對照組(B組,n=16)、假手術(shù)組(C組,n=16)。采用改良Aleln's打擊法建立Wistar大鼠胸段脊髓損傷模型。A組于術(shù)后立即給予EODF, B組及C組給予正常飲食。各組大鼠分別于術(shù)后6h、1d、3d、7d行動物行為學(xué)BBB評分(Basso Beattie and Bresnahan scores, BBB scores)觀察大鼠運(yùn)動功能變化后處死,取損傷段脊髓組織行石蠟切片后,通過蘇木素-伊紅(Hematoxylin-eosin,HE)染色來觀察脊髓組織結(jié)構(gòu)變化,并通過免疫組化檢測(SP法)觀察凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表達(dá)情況,觀察炎性因子白介素-6(Interleukin-6, IL-6)、白介素-10(Interleukin-10, IL-10)的表達(dá)情況;運(yùn)用ELISA法檢測各組大鼠血清中IL-6、IL-10的含量。結(jié)果：1.行為學(xué)觀察結(jié)果：脊髓損傷后6h,A、B兩組均表現(xiàn)出雙后肢癱瘓的嚴(yán)重運(yùn)動功能障礙,BBB評分均為0.00±0.00,與C組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；隨時間延長,A、B兩組BBB評分均呈上升趨勢,在脊髓損傷3d后,A、B兩組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),A組出現(xiàn)后肢三個關(guān)節(jié)(髖、膝、踝關(guān)節(jié))的輕微活動,BBB評分為4.00±0.82,而B組僅出現(xiàn)髖、膝一到兩個關(guān)節(jié)的輕微活動,評分為1.75±0.50；至脊髓損傷7d后,A、B兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),A組可見足底負(fù)重位及足背負(fù)重步行,BBB評分為9.00±0.82,而B組僅見兩個關(guān)節(jié)輕微活動及一個關(guān)節(jié)的較大幅度活動,BBB評分為5.50±1.29。2.HE染色結(jié)果：A、B兩組經(jīng)造模后脊髓組織均可見不同程度的出血灶、炎性細(xì)胞浸潤以及空洞形成,可見明顯的神經(jīng)細(xì)胞變性,灰白質(zhì)界限欠清；較之于B組,A組經(jīng)EODF干預(yù)后病理學(xué)改變可見改善；C組脊髓結(jié)構(gòu)規(guī)則,灰白質(zhì)界限分明,白質(zhì)致密,無明顯出血、水腫、炎細(xì)胞浸潤。3.免疫組化結(jié)果：(1) Caspase-3、Bax:脊髓損傷6h后,與C組比較,A、B兩組Caspase-3表達(dá)(分別為34.67±0.98,35.94±3.17)及Bax表達(dá)(分別為39.09±0.82,40.16±1.09)均明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；隨時間延長,A、B兩組Caspase-3及Bax表達(dá)均呈先升后降趨勢,峰值均出現(xiàn)在1d,在脊髓損傷3d后,A組Caspase-3、Bax表達(dá)均值(26.87±0.77,37.93±0.84)小于B組(31.47±1.56,39.69±0.88),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；至脊髓損傷7d后,A組Caspase-3、Bax表達(dá)均值(21.75±0.99,31.36±1.90)明顯小于B組(31.43±2.09,39.01±1.65),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。提示EODF可減少脊髓組織中Caspase-3、Bax的表達(dá)。(2)Bcl-2：與C組比較,脊髓損傷6h后,A、B兩組Bcl-2表達(dá)(分別為12.05±1.12,10.78±0.72)均明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；隨時間延長,A、B兩組Bel-2表達(dá)均呈先升后降趨勢,峰值出現(xiàn)在3d,在脊髓損傷1d、3d、7d后,A組Bcl-2表達(dá)均值(27.25±0.85,37.11±0.57,31.53±0.82)均大于B組(20.41±0.75,25.23±0.71,22.23±0.97),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。提示EODF可增加脊髓組織中Bcl-2的表達(dá)。(3)IL-6：脊髓損傷6h后,A、B兩組IL-6表達(dá)(分別為31.30±2.57,31.64±1.73)與C組比較均明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);隨時間延長,A組IL-6表達(dá)呈先升后降趨勢,峰值在1d,B組IL-6表達(dá)呈上升趨勢,在脊髓損傷3d、7d后,A組IL-6表達(dá)均值(28.41±1.68,27.09±1.34)小于B組(34.64±2.69,35.16±2.75),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。提示EODF可減少脊髓組織中IL-6的表達(dá)。(4)IL-10：與C組比較,脊髓損傷6h后,A、B兩組IL-10表達(dá)(分別為15.98±0.88,15.60±1.33)均明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)：隨時間延長,A、B兩組IL-10表達(dá)均呈上升趨勢,在脊髓損傷1d后,A組IL-10表達(dá)均值(17.62±0.85)大于B組(16.39±1.38),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；至脊髓損傷3d、7d后,A組IL-10表達(dá)均值(20.47±1.87,16.75±1.70)大于B組(23.51±1.85,17.13±1.22),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。提示EODF可增加脊髓組織中IL-10的表達(dá)。4血清IL-6、IL-10含量的ELISA結(jié)果：(1)IL-6：脊髓損傷6h后,A、B兩組血清IL-6含量(分別為87.07±3.72,87.77±4.41)與C組比較均明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；隨時間延長,A、B兩組血清IL-6含量呈先升后降趨勢,A組峰值在1d,B組峰值在3d,在脊髓損傷3d、7d后,A組血清IL-6含量均值(101.56±8.55,51.42±6.29)小于B組(121.79±4.69,108.24±4.56),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。提示EODF可減少血清IL-6的產(chǎn)生。(2)IL-10：脊髓損傷6h后,A、B兩組血清IL-10含量(分別為21.83±0.27,21.71±0.64)與C組比較均明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；隨時間延長,A、B兩組血清IL-10含量均呈上升趨勢,在脊髓損傷3d、7d后,A組血清IL-10含量均值(29.11±0.54,34.41±0.57)小于B組(25.76±0.64,26.12±1.61),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。提示EODF可減少血清IL-10的產(chǎn)生。5. EODF組相關(guān)性分析結(jié)果：Caspase-3、Bax、脊髓IL-6陽性細(xì)胞表達(dá)及血清IL-6與BBB評分之間均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.756、-0.730、-0.774、-0.734,P0.01);Bcl-2、脊髓IL-10陽性細(xì)胞表達(dá)及血清IL-10與BBB評分之間均呈正相關(guān)(r=0.899、0.933、0.951,P0.01)；脊髓IL-6陽性細(xì)胞表達(dá)與血清IL-6含量之間呈正相關(guān)(r=0.636,P0.01)；脊髓組織IL-10陽性細(xì)胞表達(dá)與血清IL-10含量之間呈正相關(guān)(r=0.882,P0.01)。結(jié)論：1. EODF可改善ASCI大鼠后肢運(yùn)動功能,提示其對SCI具有治療作用；2. EODF能夠減輕ASCI后神經(jīng)細(xì)胞凋亡及炎性反應(yīng),具有神經(jīng)保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與抑制促凋亡因子Caspase-3、Bax的表達(dá)及促炎性因子IL-6的產(chǎn)生,增加抗凋亡因子Bcl-2的表達(dá)及抗炎因子IL-10的產(chǎn)生來抑制細(xì)胞凋亡及炎性反應(yīng),減輕繼發(fā)性損傷,促進(jìn)功能恢復(fù)有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R651.2

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本文編號：2421608