【摘要】：目的:利用顯微外科操作技術(shù)建立大鼠全結(jié)直腸切除、回腸貯袋肛管吻合(ileal pouch-anal anastomosis,IPAA)模型,比較三硝基苯磺酸(trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)和葡聚糖硫酸鈉(dextran surfate sodium,DSS)誘導(dǎo)大鼠回腸貯袋炎模型的特點(diǎn),為回腸貯袋炎的研究提供可靠的動物模型。方法:利用顯微外科技術(shù)建立雄性SD大鼠IPAA模型,將建立的大鼠模型進(jìn)行隨機(jī)分組,共分為5組:即IPAA+DSS組,IPAA術(shù)后第31天開始,給予4%DSS溶液100ml,連續(xù)4天;IPAA+TNBS組,IPAA術(shù)后第31天,給予混合50%無水乙醇的TNBS(200mg/kg)按1:1的體積比經(jīng)肛門灌腸1次;IPAA+NS組,IPAA術(shù)后第31天,給予0.9%生理鹽水經(jīng)肛門灌腸1次;IPAA組為無干預(yù)組,即IPAA術(shù)后未進(jìn)行任何干預(yù);Sham組為假手術(shù)組,只進(jìn)行開關(guān)腹操作。實(shí)驗(yàn)期間對大鼠造影劑灌腸后進(jìn)行貯袋造影檢查,觀察造影劑在貯袋內(nèi)的變化并探索對大鼠灌腸時的體位及灌腸管插入的長度。實(shí)驗(yàn)期間觀察并記錄各組大鼠一般狀況(如精神狀態(tài)、活動度)、體重變化、血便情況、糞便性狀(評分);采用糞便直接涂片法檢測各IPAA模型組大鼠糞便菌群的分布情況;術(shù)后第35天取IPAA+DSS組、IPAA+TNBS組、IPAA+NS組、IPAA組大鼠的小腸近端、小腸中段、小腸遠(yuǎn)端組織及貯袋組織,取Sham組大鼠小腸近端、小腸中段、小腸遠(yuǎn)端組織,采用HE染色法進(jìn)行組織病理學(xué)檢測并進(jìn)行評分;采取免疫組織化學(xué)法檢測各組組織腸黏膜緊密連接蛋白Occludin的表達(dá)水平并進(jìn)行評分。結(jié)果:1.回腸貯袋造影結(jié)果回腸貯袋造影結(jié)果顯示,大鼠左側(cè)臥位時給予灌腸,造影劑可充分與回腸貯袋黏膜接觸,充盈貯袋,并確定灌腸管插入的肛門深度為3.5cm。2.一般情況及體重變化IPAA+DSS組及IPAA+TNBS組的大鼠均出現(xiàn)不同程度的懶惰、倦怠,毛發(fā)枯燥,沒有光澤,IPAA+NS組、IPAA組及Sham組大鼠活動敏捷,毛發(fā)光亮;IPAA術(shù)后大鼠體重均出現(xiàn)下降,約在術(shù)后4周恢復(fù)術(shù)前體重,Sham組大鼠體重穩(wěn)定增長;術(shù)后第31天進(jìn)行干預(yù),IPAA+DSS組大鼠體重出現(xiàn)持續(xù)下降,4天后,下降幅度為(58.83±5.88)g,IPAA+TNBS組大鼠體重同樣出現(xiàn)持續(xù)下降,下降幅度為(28.67±5.57)g,兩者比較,IPAA+TNBS組的大鼠體重下降幅度小于IPAA+DSS組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),IPAA+NS組、IPAA組及Sham組的大鼠體重穩(wěn)定增長。3.血便情況及糞便性狀I(lǐng)PAA+DSS組大鼠均出現(xiàn)血便(6/6),IPAA+TNBS組大鼠均出現(xiàn)稀便,其中部分大鼠出現(xiàn)黏液膿血便(3/6),IPAA+NS、IPAA+NI及Sham組的大鼠為正常便。干預(yù)前,各組大鼠間糞便評分比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),IPAA+DSS組及IPAA+TNBS組大鼠干預(yù)后,糞便評分(1.50±0.55)、(1.67±0.82)均低于IPAA+NS組、IPAA組及Sham組的大鼠(4.01±0.89)、(4.33±0.82)、(4.03±0.78),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=16.96,P0.01),IPAA+DSS組大鼠及IPAA+TNBS組兩組大鼠糞便評分比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.糞便菌群分布情況糞便菌群分布結(jié)果顯示,IPAA+DSS組,細(xì)菌總數(shù)略減少,革蘭陽性桿菌較正常范圍明顯減少,革蘭陰性桿菌較正常范圍增多,革蘭陽性球菌和革蘭陰性球菌在正常范圍;IPAA+TNBS組細(xì)菌總數(shù)略減少,革蘭陽性桿菌較正常顯著減少,革蘭陰性桿菌較正常范圍明顯增多,革蘭陽性球菌和陰性球菌在正常范圍;IPAA+NS、IPAA+NI組的大鼠糞便菌群分布正常。5.各組大鼠貯袋及小腸組織病理學(xué)檢測結(jié)果干預(yù)后,IPAA+DSS組和IPAA+TNBS組大鼠貯袋病理組織學(xué)評分均高于IPAA組、IPAA+NS組、Sham組(F=55.068,P0.05),且IPAA+TNBS組貯袋評分高于IPAA+DSS組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),IPAA+NS組、IPAA組及Sham組的大鼠比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);小腸組織的病理組織學(xué)評分,IPAA+DSS組高于IPAA+TNBS組、IPAA+NS組、IPAA組及Sham組大鼠,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=76.156,P0.05),IPAA+TNBS組和IPAA+NS組、IPAA組及Sham組的大鼠比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.免疫組化結(jié)果免疫組化結(jié)果顯示,回腸貯袋組織腸屏障緊密連接蛋白Occludin的表達(dá)水平,IPAA+DSS組和IPAA+TNBS組均低于IPAA+NS組、IPAA組及Sham組大鼠,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.781,P0.01),且IPAA+TNBS組低于IPAA+DSS組(P0.05),IPAA+NS組、IPAA組及Sham組的大鼠比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。小腸近端、中段、遠(yuǎn)端的Occludin蛋白表達(dá),IPAA+DSS組低于IPAA+TNBS組、IPAA+NS組、IPAA組及Sham組大鼠,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),IPAA+TNBS組和IPAA+NS組、IPAA組及Sham組的大鼠比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.利用顯微外科技術(shù),成功建立穩(wěn)定的大鼠IPAA模型;2.利用DSS和TNBS均可誘導(dǎo)大鼠回腸貯袋炎模型;3.TNBS誘導(dǎo)的大鼠回腸貯袋炎模型中菌群總數(shù)較DSS誘導(dǎo)菌群總數(shù)低,桿菌分布的變化較DSS誘導(dǎo)的IPAA模型嚴(yán)重;TNBS誘導(dǎo)下的大鼠回腸貯袋的病理組織學(xué)損傷較DSS所誘導(dǎo)的嚴(yán)重,DSS誘導(dǎo)下的大鼠非貯袋小腸組織的病理組織學(xué)損傷較TNBS所誘導(dǎo)的嚴(yán)重;TNBS誘導(dǎo)的大鼠貯袋回腸貯袋炎組織的腸屏障結(jié)構(gòu)損傷較DSS所誘導(dǎo)的嚴(yán)重,DSS誘導(dǎo)下的大鼠非貯袋小腸組織的腸屏障損傷較TNBS所誘導(dǎo)的嚴(yán)重;4.在建立大鼠回腸貯袋模型基礎(chǔ)上給予適量TNBS可以建立比DSS更加穩(wěn)定穩(wěn)定的大鼠回腸貯袋炎模型,且減輕非貯袋組織的損傷。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R656.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2410999