【摘要】：第一部分成骨不全1型膠原和SERPINF1基因突變篩查及與表型關(guān)系之研究目的:明確我國(guó)漢族人群成骨不全(osteogenesis imperfecta,OI)患者中COL1A1與COL1A2基因的突變譜,分析其突變基因型與臨床表型間的關(guān)系;同時(shí),利用全外顯子組測(cè)序技術(shù)對(duì)于未找到COL1A1和COL1A2基因突變的OI患者進(jìn)行新致病基因的篩查。方法:收集來(lái)自78個(gè)不同家庭的先證者、131例家族成員病史、靜脈血及250例健康對(duì)照人群靜脈血。所有先證者進(jìn)行COL1A1和COL1A2基因直接測(cè)序。對(duì)于可測(cè)量的OI患者,使用雙能X線(xiàn)吸收儀測(cè)量腰椎1-4骨密度(bone mineral density,BMD)。1例VI型OI先證者用全基因組外顯子測(cè)序,檢測(cè)到SERPINF1基因一個(gè)新突變。用Sanger測(cè)序法檢測(cè)另17例未測(cè)到COL1A1和COL1A2基因突變的OI患者SERPINF1基因是否突變,檢測(cè)到SERPINF1基因另一個(gè)新突變。這兩個(gè)SERPINF1基因突變的家系用實(shí)時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測(cè)等位基因拷貝數(shù)。結(jié)果:在78例OI表型的先證者中,COL1A1突變44例(56%),COL1A2突變16例(21%);SERPINF1基因突變2例(2%);16例未找到致病基因(21%)。新發(fā)現(xiàn)的COL1A1或COL1A2的突變31例。COL1A1基因的p.Gly257Arg、p.Gly767Ser、p.Gly821Ser位點(diǎn)及COL1A2的p.Gly337Ser位點(diǎn)可能是OI患者的熱點(diǎn)突變。COL1A1或COL1A2突變的先證者中,有家族史者32例(53%),散發(fā)者27例(45%),22例(37%)de novo突變。5例家系成員雖與先證者同樣突變基因型,但表型正常或基本正常。2個(gè)VI型OI先證者檢測(cè)出SERPINF1 基因一個(gè)新的純合錯(cuò)義突變c.1067TA(V356E)和一個(gè)新的純合缺失突變c.283+473_643+104del(p.Ala96_Gly215del)。這兩個(gè)家系的父親均顯示與先證者同樣的雜合突變,而兩位母親均沒(méi)有突變。等位基因拷貝數(shù)檢測(cè)顯示第一個(gè)家系先證者及其母親在SERPINF1基因上都存在缺失,而第二個(gè)家庭中,先證者及其母親無(wú)缺失。結(jié)論:本研究60例有COL1A1或COL1A2突變的先證者,31例是新的突變位點(diǎn)。COL1A1突變位點(diǎn)p.Gly257Arg、p.Gly767Ser、p.Gly821Ser及COL1A2突變位點(diǎn)p.Gly337Ser可能是OI患者的熱點(diǎn)突變。同一家系相同突變的家族成員接近正常表型,可能是由于種系嵌合、體細(xì)胞嵌合或外顯不全導(dǎo)致,遺傳咨詢(xún)時(shí)要警惕。我們的研究提示SERPINF1基因新的錯(cuò)義突變c.1067TA及大片段缺失c.283+473_643+104del可以導(dǎo)致漢族患者VI型OI。本研究為深入了解OI患者COL1A1、COL1A2及SERPINF1的致病基因突變譜及臨床表型提供重要數(shù)據(jù),為將來(lái)臨床診斷及遺傳咨詢(xún)奠定基礎(chǔ)。第二部分絕經(jīng)后婦女血清骨硬化素水平和SOST基因多態(tài)性與骨密度及骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)的關(guān)系目的:本研究旨在評(píng)估絕經(jīng)后婦女的血清骨硬化素水平及骨硬化素基因(sclerostin,SOST)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)與骨密度(bone mineral density,BMD)及骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)的關(guān)系。方法:本研究先收集了703例年齡66.7±9.1歲健康漢族絕經(jīng)后婦女,雙能X線(xiàn)吸收儀檢測(cè)腰椎及髖部BMD、同時(shí)檢測(cè)血清骨硬化素水平和骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)。骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)包括血清甲狀旁腺激素(intact parathyroid hormone,PTH)、25羥維生素D[25-hydroxyvitamin D,25(OH)D]、1型原膠原氨基末端前肽(procollagen type 1N-terminal propeptide,P1NP)和1型膠原羧基末端肽β交聯(lián)片段(β-Cross Laps of type I collagen containing cross-linked C-telopeptide,β-CTX)。檢測(cè)SOST基因的10個(gè)標(biāo)簽SNPs(rs1234612,rs1513670,rs1634330,rs1708635,rs2023794,rs7220711,rs74252774,rs851057,rs851058和rs865429)。為了獲得足夠的統(tǒng)計(jì)學(xué)力度,我們又招募了676例健康漢族絕經(jīng)后婦女,有1379例絕經(jīng)后婦女參與了檢測(cè)SOST基因SNPs與BMD的關(guān)系。結(jié)果:血清骨硬化素與腰椎、股骨頸、全髖部BMD及血清25(OH)D呈正相關(guān)(所有P0.01),但與血清β-CTX呈負(fù)相關(guān)(P0.01)。在校正了年齡、體重指數(shù)(body Mass Index,BMI)和血清25(OH)D以后,這種顯著性仍存在(所有P0.01)。然而,血清骨硬化素與年齡及血清P1NP無(wú)相關(guān)性。在703例絕經(jīng)后婦女中,我們沒(méi)有發(fā)現(xiàn)SOST的SNPs、單倍型與BMD、血清骨硬化素具相關(guān)性。SOST基因的5個(gè)SNPs與血清P1NP有相關(guān)性(rs1513670,rs851057,rs851058,rs1708635和rs1634330)。但當(dāng)我們的研究對(duì)象擴(kuò)增到1379例時(shí),經(jīng)校正年齡和BMI后,SOST基因的rs2023794、rs74252774及單倍型ACCATTCT與腰1-4 BMD具相關(guān)性(P值為0.010,0.007和0.007),即便用Bonferroni多重顯著性試驗(yàn)校正后,依然具有顯著性。其中rs2023794的CC基因型與rs74252774基因型的TT基因型較其他基因型有更高的BMD。rs2023794與rs74252774對(duì)腰椎L1-4BMD表型變異的貢獻(xiàn)率分別為0.6%與0.7%,然而,我們未發(fā)現(xiàn)SOST的10個(gè)SNPs、6個(gè)單倍型與髖部BMD具相關(guān)性。結(jié)論:我們的研究提示,在漢族健康絕經(jīng)后婦女中,血清骨硬化素水平與腰椎、股骨頸、全髖BMD及血清25(OH)D呈正相關(guān);與血清β-CTX呈負(fù)相關(guān);SOST基因的5個(gè)SNPs與血清P1NP有相關(guān)性。SOST基因的rs2023794、rs74252774及單倍型ACCATTCT與校正后的腰椎BMD呈相關(guān)性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R681.1

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本文編號(hào)：2406253