【摘要】：目的檢測胰島素樣生長因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)蛋白及其m RNA在肥胖大鼠行Roux-en-Y胃旁路手術(RYGB)前后的表達水平變化,并探討IGF-Ⅰ表達和脂肪細胞增殖、凋亡的關系。方法1選取SPF級SD雄性大鼠70只,隨機分為空白對照組(NC組)10只和高脂飲食組60只。高脂飲食組大鼠給予特定配方高脂飼料,NC組大鼠給予特定配方維持飼料,6周后測量高脂飲食組大鼠的體質量,選擇體質量增加在前20位的肥胖大鼠,隨機分為胃旁路術組(GB組)10只和假手術組(SO組)10只。GB組大鼠行RYGB,SO組大鼠行假手術,NC組大鼠不接受任何手術。GB組和SO組大鼠于術中、3組大鼠于處理后12周取腹股溝脂肪組織〔代表皮下脂肪組織(subcutaneous adipose tissue,SAT)〕和附睪脂肪組織〔代表內臟脂肪組織(visceral adipose tissue,VAT)〕各0.5 g,行免疫印跡法和實時熒光定量PCR法分別檢測脂肪組織中IGF-Ⅰ蛋白及其m RNA的表達。2轉染實驗。將SAT細胞分為空白對照組(BC組,未行轉染)、IGF-Ⅰ(+)組(即基因過表達組)、IGF-Ⅰ(+)空載體組、IGF-Ⅰ(-)組(即基因沉默組)及IGF-Ⅰ(-)空載體組,轉染相應載體,每組設3個復孔。轉染48 h后進行細胞增殖與凋亡實驗,并采用免疫印跡法檢測蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表達水平。3 Wortmannin實驗。將SAT細胞分為Wortmannin(+)IGF-Ⅰ(+)組、Wortmannin(+)IGF-Ⅰ(-)、Wortmannin(-)IGF-Ⅰ(+)及Wortmannin(-)IGF-Ⅰ(-)組,轉染相應載體類型24 h后,加入0.1 mmol/L Wortmannin,24 h后采用免疫印跡法檢測AKT、p-AKT、p-PI3K、PI3K及GAPDH的表達水平。結果 1 PCR結果表明,在SAT組織中,同GB術前組比較,GB術后組的IGF-Ⅰ蛋白及其m RNA的表達水平均降低(P0.01),而SO術前組和SO術后組的IGF-Ⅰ蛋白及其m RNA的表達水平比較差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);VAT中,5組大鼠的IGF-Ⅰ蛋白及其m RNA的表達水平比較差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法結果表明,同對應的空載體組比較,IGF-Ⅰ(+)組的增殖能力升高(P=0.04),IGF-Ⅰ(-)組的細胞增殖緩慢(P=0.04);流式細胞儀檢測結果表明,同對應的空載體組比較,IGF-Ⅰ(+)組的細胞凋亡率較低(P=0.04),IGF-Ⅰ(-)組的細胞凋亡率較高(P=0.04)。3與IGF-Ⅰ(+)空載體組比較,IGF-Ⅰ(+)組的p-PI3K/PI3K(P=0.03)和p-AKT/AKT(P=0.04)比值均升高;與IGF-Ⅰ(-)空載體組相比,IGF-Ⅰ(-)組的p-PI3K/PI3K(P=0.04)和p-AKT/AKT(P=0.04)比值均降低。與Wortmannin(+)IGF-Ⅰ(+)組比較,Wortmannin(-)IGF-Ⅰ(+)組的p-AKT/AKT比值較高(P0.05);與Wortmannin(-)IGF-Ⅰ(+)組比較,Wortmannin(-)IGF-Ⅰ(-)組的p-AKT/AKT比值較低(P0.05)。結論 IGF-Ⅰ參與大鼠皮下脂肪富集,RYGB能明顯降低大鼠皮下脂肪中IGF-Ⅰ蛋白及其m RNA的表達水平,從而達到減重效果。
[Abstract]:Objective to detect the expression of insulin-like growth factor- 鈪，

本文編號：2395878