【摘要】：第一部分Bafilomycin A1抑制鈷納米顆粒誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞細(xì)胞毒性和促炎細(xì)胞因子的釋放的實(shí)驗(yàn)研究目的:研究Bafilomycin A1對(duì)鈷納米顆粒(Co NPs)誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞細(xì)胞毒性和炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用。方法:(1)采用不同濃度的Co NPs、Co2+和Bafilomycin A1對(duì)RAW264.7細(xì)胞進(jìn)行甲基噻唑基四唑(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法檢測(cè)細(xì)胞生存率;(2)通過(guò)對(duì)照組、Co NPs組、低劑量藥物組、高劑量藥物組四組MTT分析方法檢測(cè)細(xì)胞生存率比較,評(píng)估Bafilomycin A1對(duì)Co NPs細(xì)胞毒性的抑制作用;(3)采用DAPI對(duì)RAW264.7細(xì)胞核進(jìn)行染色,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)量的變化;(4)掃描電鏡觀察各組RAW264.7細(xì)胞超微形態(tài)學(xué)的變化;(5)采用ELISA法檢測(cè)前炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)Co NPs及Co2+對(duì)RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞毒性效應(yīng)呈現(xiàn)時(shí)間、濃度依賴性;Bafilomycin A1(8n M,16n M)對(duì)RAW264.7細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞毒性;Co NPs和Co2+細(xì)胞毒性的起效濃度分別約為50、400μM;(2)隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增高RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞毒性逐漸減弱(P0.05);(3)熒光顯微鏡觀察隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增高RAW264.7細(xì)胞數(shù)量逐漸增加;(4)掃描電鏡觀察顯示Co NPs組的RAW264.7細(xì)胞偽足基本消失,且細(xì)胞明顯縮小;隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增高RAW264.7細(xì)胞的偽足逐漸增多,且細(xì)胞鋪展面積逐漸與對(duì)照組接近;(5)隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增高炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6表達(dá)逐漸減弱(P0.05)。結(jié)論:Co NPs對(duì)RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞毒性效應(yīng)強(qiáng)于Co2+;Bafilomycin A1(8n M,16n M)沒(méi)有細(xì)胞毒性。Bafilomycin A1對(duì)Co NPs所致RAW264.7細(xì)胞的細(xì)胞毒性和炎癥反應(yīng)具有保護(hù)作用。第二部分Bafilomycin A1抑制鈷納米顆粒誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究目的:研究探索Bafilomycin A1對(duì)Co NPs誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞分化的影響。方法:(1)RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)第5d,通過(guò)倒置相差顯微鏡觀察活體破骨細(xì)胞形態(tài)改變、TRAP染色、TRAP染色陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù),從細(xì)胞形態(tài)學(xué)上來(lái)評(píng)估Bafilomycin A1抑制Co NPs誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的作用;(2)培養(yǎng)第6d通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)破骨細(xì)胞基因表達(dá)從基因水平來(lái)評(píng)估Bafilomycin A1抑制Co NPs誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的作用。結(jié)果:(1)培養(yǎng)第5d,通過(guò)倒置相差顯微鏡觀察,Co NPs組不規(guī)則細(xì)胞數(shù)量增加,體積增大,多核細(xì)胞亦增多,其內(nèi)的細(xì)胞核也增多。隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增加,多核細(xì)胞數(shù)目逐漸減少,多核細(xì)胞體積逐漸變小;通過(guò)TRAP染色,Co NPs組有大量TRAP染色陽(yáng)性的破骨細(xì)胞形成,隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增加,TRAP染色陽(yáng)性的破骨細(xì)胞數(shù)目逐漸減少(p0.05)。(2)培養(yǎng)第6d Real-time PCR檢測(cè)破骨細(xì)胞基因TRAP、RANK及Cath-K的表達(dá),所得結(jié)果規(guī)律性與活體破骨細(xì)胞形態(tài)改變、TRAP染色結(jié)果一致。結(jié)論:小鼠RAW 264.7細(xì)胞能夠被RANKL誘導(dǎo)生成破骨細(xì)胞,Co NPs能夠加速誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化,Bafilomycin A1能夠抑制Co NPs誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化的進(jìn)程,呈劑量依賴性。第三部分Bafilomycin A1對(duì)鈷納米顆粒誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞不良生物學(xué)效應(yīng)保護(hù)作用的機(jī)制研究目的:研究pH值對(duì)Co NPs溶解的影響,通過(guò)H+-ATPase抑制劑Bafilomycin A1抑制RAW264.7對(duì)細(xì)胞內(nèi)的Co NPs溶解的影響、TEM超微結(jié)構(gòu)改變及氧化應(yīng)激水平的影響,初步探討B(tài)afilomycin A1對(duì)Co NPs所致體內(nèi)外不良生物學(xué)效應(yīng)保護(hù)作用的機(jī)制。方法:(1)通過(guò)ICP-MS測(cè)量Co NPs在不同p H值培養(yǎng)基中釋放Co2+的水平;(2)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞通過(guò)ICP-MS測(cè)量及EDX能譜測(cè)試,評(píng)估Bafilomycin A1抑制細(xì)胞內(nèi)Co NPs溶解作用;(3)利用TEM觀察各組RAW 264.7細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變;(4)收集各組RAW 264.7細(xì)胞抽提液,通過(guò)GSH/GSSG、SOD、CAT、GPx水平檢測(cè),評(píng)估Bafilomycin A1抑制細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的作用。結(jié)果:(1)培養(yǎng)基中離子釋放呈現(xiàn)時(shí)間、p H值依賴關(guān)系,各時(shí)間點(diǎn)釋放的濃度均小于Co2+細(xì)胞毒性起效濃度;(2)細(xì)胞內(nèi)Co NPs離子釋放呈現(xiàn)時(shí)間依賴關(guān)系,隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增加,細(xì)胞內(nèi)Co NPs離子釋放逐漸減少(P0.05);(3)Co NPs組RAW 264.7細(xì)胞內(nèi)溶酶體和濾泡的數(shù)目急劇增多,Co NPs被溶酶體吞噬,伴有細(xì)胞器消失;隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增高,RAW 264.7細(xì)胞內(nèi)溶酶體和濾泡的數(shù)目逐漸減少,同時(shí)消失的細(xì)胞器再次出現(xiàn);(4)Co NPs組GSH、SOD、GPx、CAT水平明顯降低,隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增高,GSH、SOD、GPx、CAT水平相應(yīng)升高。結(jié)論:Co NPs的溶解度在細(xì)胞外環(huán)境中很低,在細(xì)胞內(nèi)低p H值環(huán)境的溶酶體中更容易溶解釋放大量鈷離子,從而破壞細(xì)胞抗氧化防御機(jī)制,引起氧化應(yīng)激損傷,是Co NPs引起細(xì)胞毒性反應(yīng)、炎癥反應(yīng)及誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化等一系列不良生物學(xué)反應(yīng)的根本原因。第四部分Bafilomycin A1抑制鈷納米顆粒誘導(dǎo)的小鼠顱骨周圍急性炎癥反應(yīng)和骨溶解作用的實(shí)驗(yàn)研究目的:研究Bafilomycin A1對(duì)Co NPs誘導(dǎo)的小鼠顱骨周圍急性炎癥反應(yīng)和骨溶解作用的影響。方法:(1)建立小鼠顱骨周圍急性炎癥反應(yīng)和骨吸收注射模型,各組顱骨周圍軟組織病理學(xué)切片染色觀察及炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)分析;(2)各組顱骨病理學(xué)切片染色觀察及骨組織計(jì)量學(xué)數(shù)據(jù)測(cè)量;(3)各組Micro-CT分析;(4)各組顱骨周圍軟組織促炎細(xì)胞因子的測(cè)量。結(jié)果:(1)顱骨周圍軟組織病理學(xué)切片染色觀察及炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)分析結(jié)果提示Co NPs組細(xì)胞浸潤(rùn)最密集,滿視野均是核染成深藍(lán)色巨噬細(xì)胞或淋巴細(xì)胞,隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增加,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)目逐漸減少(p0.05)。(2)顱骨病理學(xué)切片染色觀察及骨組織計(jì)量學(xué)數(shù)據(jù)測(cè)量結(jié)果提示Co NPs組的樣本可見(jiàn)顱骨骨吸收明顯,伴炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增加,骨吸收破壞范圍減小,溶解面積減小,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)目逐漸減少。(3)Micro-CT分析結(jié)果提示Co NPs組骨吸收明顯、隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增加,骨吸收破壞范圍減小。隨著B(niǎo)afilomycin A1作用濃度的增加BMD和BMC顯著升高(P0.05)。(4)顱骨周圍軟組織促炎細(xì)胞因子表達(dá)結(jié)果提示Co NPs組軟組織內(nèi)TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表達(dá)量顯著增高(P0.05)。隨著B(niǎo)afilomycin A1的劑量的增加而降低,呈劑量依賴性(P0.05)。結(jié)論:Co NPs可以誘導(dǎo)小鼠顱骨周圍產(chǎn)生炎癥反應(yīng),分泌參與破骨細(xì)胞調(diào)控的TNF-α,IL-1β和IL-6等炎癥性細(xì)胞因子,引起顱骨骨吸收。Bafilomycin A1具有抑制Co NPs誘導(dǎo)的小鼠顱骨周圍產(chǎn)生炎癥反應(yīng),抑制顱骨骨吸收的作用,呈劑量效應(yīng)關(guān)系。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R687.4

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 俞保柱;李慶文;王成勇;張家俊;;膀胱炎性肌纖維母細(xì)胞瘤4例報(bào)道及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年12期

2 蔡運(yùn)火;鮑航行;王金法;單樂(lè)天;杜文喜;趙鵬;方劍利;肖魯偉;童培建;;右歸飲對(duì)假體周圍骨溶解大鼠模型體外培養(yǎng)破骨細(xì)胞分化和相關(guān)基因表達(dá)的影響[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2012年01期

3 蔡運(yùn)火;鮑航行;王金法;趙鵬;胡淼鋒;肖魯偉;童培建;;人工關(guān)節(jié)假體周圍骨溶解的發(fā)生機(jī)制及防治[J];浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2012年04期

4 徐盛明,劉明媛,李保春;全身炎癥反應(yīng)綜合征和多器官功能障礙綜合征的治療進(jìn)展[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年08期

5 韓兆峰;王甲漢;李志清;易朝暉;黃磊;;重度燒傷患者中后期肉芽創(chuàng)面多種微量元素的動(dòng)態(tài)變化[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年03期

6 陳嵐;鄭玉濤;袁小兵;趙展;包亦望;;人工髖關(guān)節(jié)模擬試驗(yàn)機(jī)的研制[J];硅酸鹽通報(bào);2010年03期

7 孫玲;侯建明;;阿托伐他汀鈣對(duì)原代成骨細(xì)胞OPG、RANKL、M-CSF基因表達(dá)的影響[J];中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志;2011年04期

8 孫國(guó)靜;趙建寧;;人工關(guān)節(jié)無(wú)菌松動(dòng)動(dòng)物模型的建立與應(yīng)用[J];中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志;2011年04期

9 邵振興;蔣青;;假體周圍骨質(zhì)溶解細(xì)胞分子生物學(xué)研究[J];國(guó)際骨科學(xué)雜志;2007年03期

10 韋金忠;戴閩;;人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)的生物學(xué)防治[J];國(guó)際骨科學(xué)雜志;2008年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 周宇;;關(guān)于PM_(2.5)的研究現(xiàn)狀及展望[A];2013中國(guó)環(huán)境科學(xué)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（第八卷）[C];2013年

2 Liqian Mo;Lianbing Hou;Dan Guo;Xiaoyan Xiao;Ping Mao;Xixiao Yang;;Preparation and Characterization of Teniposide PLGA Nanoparticles and Their Uptake in Human Glioblastoma U87MG Cells[A];2013年廣東省藥師周大會(huì)論文集[C];2013年

3 孫小強(qiáng);Jing Su;Jiguang Bao;Tao Peng;Le Zhang;Yuanyuan Zhang;Yunzhi Yang;Xiaobo Zhou;;骨重建的基于信號(hào)通路的細(xì)胞因子組合治療的預(yù)測(cè)(英文)[A];第十一屆全國(guó)博士生學(xué)術(shù)年會(huì)（生物醫(yī)藥專題）論文集（上冊(cè)，大會(huì)報(bào)告）[C];2013年

4 Jianbin Zhang;Rui Cao;Tongjian Cai;Michael Aschner;Fang Zhao;Ting Yao;Yaoming Chen;Zipeng Cao;Wenjing Luo;Jingyuan Chen;;The role of autophagy dysregulation in manganese-induced dopaminergic neurodegeneration[A];第十一屆全國(guó)博士生學(xué)術(shù)年會(huì)（生物醫(yī)藥專題）論文集（中冊(cè)，墻報(bào)P1-P24）[C];2013年

5 龔春梅;楊淋清;陶功華;劉慶成;劉建軍;莊志雄;;短期暴露于納米SiO_2對(duì)HaCaT細(xì)胞基因組DNA甲基化的影響[A];達(dá)能營(yíng)養(yǎng)中心青年科學(xué)工作者論壇優(yōu)秀論文集2013年第2期[C];2013年

6 蘇媛媛;彭飛;何耀;;水溶性CdTe量子點(diǎn)的生物安全性評(píng)價(jià)[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第29屆學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集——第35分會(huì)：納米生物醫(yī)學(xué)中的化學(xué)問(wèn)題[C];2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王晉東;人骨保護(hù)素基因治療抑制磨損顆粒誘導(dǎo)骨溶解的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

2 曹鋒;鎘對(duì)DNA代謝的影響和大豆異黃酮的保護(hù)作用[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

3 張濤;腺相關(guān)病毒攜帶的骨保護(hù)素基因治療小鼠膝關(guān)節(jié)假體無(wú)菌性松動(dòng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2008年

4 殷德振;體內(nèi)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)sFlt-1抑制小鼠骨肉瘤生長(zhǎng)和相關(guān)癌基因表達(dá)的研究[D];山東大學(xué);2008年

5 劉洪濤;人工關(guān)節(jié)磨屑表征及磨屑生物反應(yīng)研究[D];中國(guó)礦業(yè)大學(xué);2008年

6 陳明;重組人骨形態(tài)形成蛋白-2緩釋體預(yù)防人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2008年

7 張鍇;SCID-Hu模型建立及循環(huán)血單核細(xì)胞對(duì)假體周圍組織形成的影響[D];山東大學(xué);2009年

8 張來(lái)波;細(xì)胞介導(dǎo)的骨保護(hù)素基因治療對(duì)磨損顆粒導(dǎo)致的小鼠假體松動(dòng)作用的研究[D];山東大學(xué);2010年

9 袁平;鈦顆粒對(duì)異位骨化局部干預(yù)的基礎(chǔ)研究[D];中南大學(xué);2010年

10 杜斌;骨水泥型人工髖關(guān)節(jié)置換后假體柄松動(dòng)的機(jī)制及淫羊藿苷對(duì)微粒誘導(dǎo)骨吸收的干預(yù)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 梁椺斌;全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)有無(wú)螺釘技術(shù)對(duì)髖臼穩(wěn)定性的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

2 張勇;PMMA骨水泥顆粒對(duì)大鼠巨噬細(xì)胞SOCS1及SOCS3基因表達(dá)的影響[D];汕頭大學(xué);2011年

3 方春龍;三焦辨證與老年全身炎癥反應(yīng)綜合征客觀指標(biāo)的相關(guān)性研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

4 孫佳凝;ICP-AES（電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀）檢測(cè)牙科合金材料的離子析出[D];四川大學(xué);2003年

5 王慧;重金屬Cu～（2+）、Cd～（2+）脅迫對(duì)幾種蠅類抗氧化酶系統(tǒng)的影響[D];浙江大學(xué);2005年

6 高緒仁;紅霉素抑制人工關(guān)節(jié)磨屑誘導(dǎo)的骨溶解[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

7 程濤;人工關(guān)節(jié)磨損顆粒刺激后誘導(dǎo)iNOS、ONOO～-、Caspase-3表達(dá)和細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];南昌大學(xué);2006年

8 劉濤;氧化脅迫與線粒體在鎘誘導(dǎo)細(xì)胞損傷中的作用[D];蘭州大學(xué);2007年

9 金文達(dá);鉛誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究[D];南華大學(xué);2007年

10 石丹;納米四氧化三鐵和鎘聯(lián)合作用對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞DNA損傷的影響[D];華中科技大學(xué);2006年

，

本文編號(hào)：2386996