發(fā)布時(shí)間：2018-12-13 01:22

【摘要】：【目的】創(chuàng)傷性脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)是由于外力作用造成脊髓神經(jīng)元的急性壞死,繼發(fā)性凋亡將進(jìn)一步加重細(xì)胞損傷,臨床表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)、感覺等多功能障礙,嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量。既往發(fā)現(xiàn),SCI后氧化應(yīng)激反應(yīng)是Caspase凋亡通路激活的重要機(jī)制,也是高壓氧(hyperbaric oxygen,HBO)治療最初的理論依據(jù)。而在最新研究揭示,線粒體GTPase結(jié)構(gòu)蛋白Drp1的表達(dá)變化要早于經(jīng)典凋亡通路的啟動(dòng)。因此我們推測,線粒體GTPase相關(guān)通路可能在HBO治療大鼠SCI中起到關(guān)鍵調(diào)控作用,但國內(nèi)外未見報(bào)導(dǎo)。本研究擬通過神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能評定、脊髓組織切片及Western Blot蛋白檢測等手段,探討大鼠SCI后GTPase相關(guān)通路中Drp1、Fis1、Mfn1/Mfn2、Cyt C、Caspase-3等關(guān)鍵蛋白的變化規(guī)律及該通路調(diào)控下不同時(shí)間窗HBO治療對其神經(jīng)保護(hù)的調(diào)控機(jī)制,為SCI急性期的臨床救治提供新理論依據(jù)和技術(shù)選擇。【方法】第一部分:將SD大鼠隨機(jī)歸入到陰性對照的Con組、僅椎板敲除的Sham組及脊髓打擊的SCI組,通過BBB下肢運(yùn)動(dòng)評分、運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位(MEP)及組織切片HE染色來評估SCI后神經(jīng)元運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況,通過TUNEL檢測大鼠SCI后神經(jīng)元凋亡數(shù)量,通過Western Blot檢測SCI后6h、12h、24h、48h、72h、7d、10d時(shí)損傷神經(jīng)組織中Drp1、Fis1、Mfn1/Mfn2蛋白含量的時(shí)態(tài)變化。第二部分:在第一部分基礎(chǔ)上,隨機(jī)將SD大鼠歸入Sham組、SCI組及高壓氧治療的HBO組,其中HBO組根據(jù)介入時(shí)間窗又分為HBO-24h組、HBO-48h組、HBO-72h組三個(gè)亞組。通過BBB評分及MEP檢測評估神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況。在全部完成3d療程的HBO后取材,并通過組織切片HE染色及TUNEL檢測不同時(shí)間窗HBO對大鼠SCI后神經(jīng)修復(fù)的影響,通過Western Blot檢測不同時(shí)間窗HBO對大鼠SCI后損傷脊髓組織中Drp1、Fis1、Mfn1/Mfn2及Cyt C、Caspase-3蛋白表達(dá)的影響。【結(jié)果】第一部分SCI組大鼠脊髓組織HE染色切片可見脊髓組織嚴(yán)重破壞,灰、白質(zhì)分界模糊,白質(zhì)松散不規(guī)則,損傷區(qū)出現(xiàn)壞死灶、微囊腔改變、尼氏體形成,BBB評分及MEP波幅在損傷低峰后有一定程度的提高,TUNEL陽性細(xì)胞大量表達(dá),與Con組及Sham組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。Drp1、Fis1的表達(dá)在SCI后6h內(nèi)明顯下降低于正常值,12h后呈上升趨勢且高于正常值,48h達(dá)到峰值后開始下降,10d接近正常值,呈現(xiàn)先下降后升高的趨勢;而Mfn1/Mfn2的表達(dá)在SCI后6h內(nèi)上調(diào)高于正常值,12h后呈下降趨勢且低于正常值,48h達(dá)到低峰后再次上調(diào),10d后與正常值接近,各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第二部分SCI后第7d,HBO各亞組的BBB評分、MEP波幅及HE染色切片均可見神經(jīng)功能及細(xì)胞結(jié)構(gòu)明顯改善。與SCI組相比,TUNEL陽性細(xì)胞有不同程度減少,損傷的脊髓組織中Drp1、Fis1表達(dá)水平下調(diào),Mfn1/Mfn2表達(dá)水平上調(diào),Cyt C及Caspase-3表達(dá)水平下調(diào),與SCI組相比均具有顯著差異(P0.05)。且以上變化在HBO-24h組更顯著,與HBO-48h組、HBO-72h組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�！窘Y(jié)論】大鼠SCI后可見神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能下降、神經(jīng)元凋亡,且10天內(nèi)均可見Drp1、Fis1及Mfn1/Mfn2表達(dá)量呈時(shí)相性變化。早期HBO介入可抑制凋亡,其對中樞神經(jīng)的保護(hù)作用可能跟Drp1和Fis1表達(dá)下調(diào)、Mfn1/Mfn2表達(dá)上調(diào)的調(diào)控有關(guān),且SCI后24h進(jìn)行HBO治療可對線粒體GTPase相關(guān)通路起到更有效調(diào)控。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R651.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2375601