發(fā)布時間：2018-12-05 15:01

【摘要】：目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)復(fù)合綠色熒光蛋白(GFP)定向誘導(dǎo)向神經(jīng)細(xì)胞分化及其促進(jìn)大鼠外周損傷神經(jīng)的再生。方法：應(yīng)用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的貼壁特性復(fù)合連續(xù)換液法獲取原代細(xì)胞,培養(yǎng)獲取純度及活力較高、形態(tài)較為統(tǒng)一的第三代細(xì)胞,第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)經(jīng)載GDNF基因復(fù)合綠色熒光蛋白(GFP)的質(zhì)粒以脂質(zhì)體為介導(dǎo)轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)分化,記錄對比細(xì)胞活力及形態(tài)學(xué)方面的變化,通過免疫熒光鑒定神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的熒光表達(dá)確定轉(zhuǎn)染結(jié)果。鉗夾法統(tǒng)一建立坐骨神經(jīng)損傷模型,將誘導(dǎo)培養(yǎng)后形態(tài)學(xué)較為良好的細(xì)胞濃縮后植入周圍神經(jīng)再生室模型,術(shù)后定期觀察統(tǒng)計坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(SFI)、完整解剖實驗大鼠雙側(cè)腓腸肌稱重,測量靶肌肉濕質(zhì)量率、損傷神經(jīng)再生室段解剖出神經(jīng)組織行自動病理圖文系統(tǒng)分析神經(jīng)再生纖維、靶肌肉冰凍切片行DAPI染色觀察細(xì)胞萎縮、核凝聚狀態(tài)及形態(tài)學(xué)變化、神經(jīng)損傷再生室組織取材電鏡觀察神經(jīng)顯微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果：實驗結(jié)果證實骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)分化組相關(guān)數(shù)據(jù)均較未經(jīng)誘導(dǎo)對照組顯著,這充分肯定了GDNF基因的確切作用,經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長活躍分化良好,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)特異表達(dá),神經(jīng)營養(yǎng)因子轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)組坐骨神經(jīng)掃描電鏡下超微結(jié)構(gòu)再生更加明顯,細(xì)胞核染色可見實驗組能明顯抑制靶肌肉的萎縮。結(jié)論：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)復(fù)合綠色熒光蛋白(GFP)誘導(dǎo)后可向神經(jīng)細(xì)胞分化,特異表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞相關(guān)表面標(biāo)志。定向誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞注入大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型可較對照組明顯改善坐骨神經(jīng)相關(guān)指數(shù)。
[Abstract]:Aim: to investigate the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) into nerve cells induced by glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF) combined with green fluorescent protein (GFP) and promote the regeneration of peripheral injured nerves in rats. Methods: the adherent characteristics of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were used to obtain primary cells by continuous fluid exchange. The third generation cells with high purity and activity were obtained. The third generation of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) (BMSCs) was induced to differentiate by liposome mediated transfection with GDNF gene and green fluorescent protein (GFP). The changes of cell viability and morphology were recorded. The fluorescent expression of neuron-specific enolase (NSE) was confirmed by immunofluorescence. The sciatic nerve injury model was established by clamp method, and the model of sciatic nerve function index (SFI),) was observed regularly after operation. The model of sciatic nerve injury was implanted into peripheral nerve regeneration chamber with better morphology after induction and culture. The sciatic nerve function index (SFI),) was observed regularly after operation. In the complete anatomical experiment, the bilateral gastrocnemius muscle was weighed, the wet mass rate of target muscle was measured, and the nerve tissue was dissected to analyze the nerve regeneration fiber by automatic pathological graph and text system. The atrophy was observed by DAPI staining in frozen section of target muscle. Nuclear condensation and morphological changes were observed. The microstructure of nerve was observed by electron microscope. Results: the data of bone marrow mesenchymal stem cells induced by glial cell derived neurotrophic factor transfection were significantly higher than that of uninduced control group, which fully confirmed the exact role of GDNF gene. Bone marrow mesenchymal stem cells transfected with glial cell-derived neurotrophic factor (GDNF) were well differentiated and expressed neuron-specific enolase (NSE). The ultrastructure regeneration of sciatic nerve was more obvious under scanning electron microscope in the group induced by neurotrophic factor, and the atrophy of target muscle was obviously inhibited in the experimental group by nuclear staining. Conclusion: bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) induced by glial cell derived neurotrophic factor (GDNF) combined with green fluorescent protein (GFP) can differentiate into neural cells and specifically express neuron-related surface markers. The model of sciatic nerve injury induced by directional differentiation could improve the sciatic nerve related index significantly compared with the control group.
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R688

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7 倪海波;組蛋白乙�；揎棇Υ笫驝6膠質(zhì)瘤細(xì)胞中GDNF基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究[D];蘇州大學(xué);2014年

8 任慶先;膠質(zhì)瘤細(xì)胞中GDNF基因啟動子1區(qū)甲基化修飾對其基因轉(zhuǎn)錄的影響[D];蘇州大學(xué);2012年

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本文編號：2365258