【摘要】：目的1.探究在體外條件下白細胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)對大鼠髓核細胞的凋亡誘導作用;2.探究修飾有骨形態(tài)發(fā)生蛋白質(zhì)-7(Bone Morphogenetic Protein-7,BMP-7)功能片段的功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠(RADKPS)在體外條件下能否抑制IL-1β對大鼠髓核細胞(Nucleus Pulposus Cells,NPCs)的凋亡誘導作用。方法體外分離培養(yǎng)SD大鼠的NPCs,取第3代NPCs分別在無BMP-7功能片段的RADA16-I或修飾有BMP-7功能片段的RADKPS中培養(yǎng),然后加入IL-1β對大鼠髓核細胞進行凋亡誘導。試驗共分3組:A組(無IL-1β干預的RADA16-I組)、B組(有IL-1β干預的RADA16-I組)、C組(有IL-1β干預的RADKPS組)。凋亡誘導48小時后,分別通過CCK-8法及DAPI染色檢測各組細胞增殖能力;通過Calcein-AM/PI雙染觀察各組細胞活性;分別通過DAPI染色和TUNEL熒光染色觀察各組細胞凋亡情況;通過RT-PCR檢測各組凋亡相關基因的相對表達量,即自殺相關因子(Factor Associated Suicide,Fas),自殺相關因子配體(The Ligand of Factor Associated Suicide,FasLg),B細胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相關X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase-3);通過RT-PCR檢測各組細胞外基質(zhì)相關基因的相對表達量,即蛋白多糖(Aggrecan,AGG),II型膠原(Collagen type II,COLII)和人性別決定區(qū)Y框蛋白9(Sex determining region Y-box 9,SOX-9);通過Caspase-3和Caspase-9活性試劑盒檢測各組中Caspase-3和Caspase-9的活性。結(jié)果1.細胞增殖能力:B組及C組中細胞的增殖能力較對照組A組均明顯降低(P0.05),同時C組中細胞的增殖能力明顯高于B組(P0.05);2.細胞活性(Calcein-AM/PI雙染):B組及C組中死細胞所占的比例均明顯高于較對照組A組(P0.05),同時C組中死細胞所占的比例明顯低于B組(P0.05);3.細胞凋亡(TUNEL染色):B組及C組中凋亡細胞所占的比例均明顯高于對照組A組(P0.05),同時C組中凋亡細胞所占的比例明顯低于B組(P0.05);4.凋亡相關基因的mRNA相對表達量:B組及C組中促進凋亡的基因Fas,Bax及Caspase-3的mRNA相對表達量均明顯高于對照組A組(P0.05),同時C組中三者的mRNA相對表達量均明顯低于B組(P0.05);B組及C組中抗凋亡的基因Bcl-2的mRNA的相對表達量均明顯低于對照組A組(P0.05),同時C組中Bcl-2的mRNA相對表達量明顯高于B組(P0.05);三組之間的FasLg的mRNA相對表達量均無明顯差異(P0.05);5.細胞外基質(zhì)相關基因的相對表達量:B組及C組中AGG、COLII和SOX-9的mRNA的相對表達量均明顯低于對照組A組(P0.05),同時C組中三者mRNA的相對表達量均明顯高于B組(P0.05);6.Caspase-3和Caspase-9的活性:B組及C組中Caspase-3和Caspase-9的活性均明顯高于對照組A組(P0.05),同時C組中Caspase-3和Caspase-9的活性均明顯低于B組(P0.05)。結(jié)論本實驗在體外條件下初步探索了IL-1β所誘導的SD大鼠髓核細胞凋亡的主要機制可能是經(jīng)Fas介導的線粒體參與的II型凋亡途徑,同時修飾有BMP-7功能片段的功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠(RADKPS)可在體外條件下抑制IL-1β對髓核細胞的凋亡誘導作用,說明了RADKPS在修復退變椎間盤方面具有一定的應用潛力。
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【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R681.5

【參考文獻】

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1 Xiao-Wei Liu;Jin Kang;Xian-Dong Fan;Li-Feng Sun;;Expression and significance of VEGF and p53 in rat degenerated intervertebral disc tissues[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2013年05期

2 程艷香;劉嶸;王琴;李秉樞;許學先;胡敏;陳璐;付瓊;濮德敏;洪莉;;Realgar-Induced Apoptosis of Cervical Cancer Cell Line Siha via Cytochrome C Release and Caspase-3 and Caspase-9 Activation[J];Chinese Journal of Integrative Medicine;2012年05期

3 ;INTERLEUKIN-6 PROTECTS ANNULUS FIBROSUS CELL FROM APOPTOSIS INDUCED BY INTERLEUKIN-1β IN VITRO[J];Chinese Medical Sciences Journal;2006年02期

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本文編號：2363636