【摘要】：目的1.探究在體外條件下白細(xì)胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)對大鼠髓核細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用;2.探究修飾有骨形態(tài)發(fā)生蛋白質(zhì)-7(Bone Morphogenetic Protein-7,BMP-7)功能片段的功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠(RADKPS)在體外條件下能否抑制IL-1β對大鼠髓核細(xì)胞(Nucleus Pulposus Cells,NPCs)的凋亡誘導(dǎo)作用。方法體外分離培養(yǎng)SD大鼠的NPCs,取第3代NPCs分別在無BMP-7功能片段的RADA16-I或修飾有BMP-7功能片段的RADKPS中培養(yǎng),然后加入IL-1β對大鼠髓核細(xì)胞進(jìn)行凋亡誘導(dǎo)。試驗(yàn)共分3組:A組(無IL-1β干預(yù)的RADA16-I組)、B組(有IL-1β干預(yù)的RADA16-I組)、C組(有IL-1β干預(yù)的RADKPS組)。凋亡誘導(dǎo)48小時(shí)后,分別通過CCK-8法及DAPI染色檢測各組細(xì)胞增殖能力;通過Calcein-AM/PI雙染觀察各組細(xì)胞活性;分別通過DAPI染色和TUNEL熒光染色觀察各組細(xì)胞凋亡情況;通過RT-PCR檢測各組凋亡相關(guān)基因的相對表達(dá)量,即自殺相關(guān)因子(Factor Associated Suicide,Fas),自殺相關(guān)因子配體(The Ligand of Factor Associated Suicide,FasLg),B細(xì)胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase-3);通過RT-PCR檢測各組細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)基因的相對表達(dá)量,即蛋白多糖(Aggrecan,AGG),II型膠原(Collagen type II,COLII)和人性別決定區(qū)Y框蛋白9(Sex determining region Y-box 9,SOX-9);通過Caspase-3和Caspase-9活性試劑盒檢測各組中Caspase-3和Caspase-9的活性。結(jié)果1.細(xì)胞增殖能力:B組及C組中細(xì)胞的增殖能力較對照組A組均明顯降低(P0.05),同時(shí)C組中細(xì)胞的增殖能力明顯高于B組(P0.05);2.細(xì)胞活性(Calcein-AM/PI雙染):B組及C組中死細(xì)胞所占的比例均明顯高于較對照組A組(P0.05),同時(shí)C組中死細(xì)胞所占的比例明顯低于B組(P0.05);3.細(xì)胞凋亡(TUNEL染色):B組及C組中凋亡細(xì)胞所占的比例均明顯高于對照組A組(P0.05),同時(shí)C組中凋亡細(xì)胞所占的比例明顯低于B組(P0.05);4.凋亡相關(guān)基因的mRNA相對表達(dá)量:B組及C組中促進(jìn)凋亡的基因Fas,Bax及Caspase-3的mRNA相對表達(dá)量均明顯高于對照組A組(P0.05),同時(shí)C組中三者的mRNA相對表達(dá)量均明顯低于B組(P0.05);B組及C組中抗凋亡的基因Bcl-2的mRNA的相對表達(dá)量均明顯低于對照組A組(P0.05),同時(shí)C組中Bcl-2的mRNA相對表達(dá)量明顯高于B組(P0.05);三組之間的FasLg的mRNA相對表達(dá)量均無明顯差異(P0.05);5.細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)基因的相對表達(dá)量:B組及C組中AGG、COLII和SOX-9的mRNA的相對表達(dá)量均明顯低于對照組A組(P0.05),同時(shí)C組中三者mRNA的相對表達(dá)量均明顯高于B組(P0.05);6.Caspase-3和Caspase-9的活性:B組及C組中Caspase-3和Caspase-9的活性均明顯高于對照組A組(P0.05),同時(shí)C組中Caspase-3和Caspase-9的活性均明顯低于B組(P0.05)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)在體外條件下初步探索了IL-1β所誘導(dǎo)的SD大鼠髓核細(xì)胞凋亡的主要機(jī)制可能是經(jīng)Fas介導(dǎo)的線粒體參與的II型凋亡途徑,同時(shí)修飾有BMP-7功能片段的功能化自組裝多肽納米纖維水凝膠(RADKPS)可在體外條件下抑制IL-1β對髓核細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用,說明了RADKPS在修復(fù)退變椎間盤方面具有一定的應(yīng)用潛力。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R681.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2363636