【摘要】：目的利用海藻酸水凝膠構(gòu)建一種新的肝細胞三維共培養(yǎng)模型。方法利用海藻酸鈉、微流控芯片,以及肝細胞C3A和臍靜脈內(nèi)皮細胞EA.hy926制備出海藻酸鈉水凝膠微纖維,實驗組為仿肝板組,同時制備出混合無序水凝膠微纖維作為對照組。利用活細胞雙熒光標記驗證微纖維內(nèi)兩種細胞排列結(jié)構(gòu),將微纖維培養(yǎng)1周,每天觀察微纖維形態(tài),檢測肝細胞活力及清蛋白(Alb)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH-L)、α1抗胰蛋白酶(α1AT)、凝血因子Ⅶ(FⅦ)、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)、細胞色素P450氧化酶1A2(CYP1A2)的水平。結(jié)果仿肝板組水凝膠內(nèi)C3A細胞在中間,有2~3排,EA.hy926細胞位于C3A細胞兩側(cè),呈現(xiàn)肝板結(jié)構(gòu)排布;對照組水凝膠內(nèi)兩種細胞則混雜在一起呈無序狀態(tài);大約3d肝組織條索形成;兩組水凝膠微纖維直徑隨時間變化差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);仿肝板組肝細胞活力在第5天達到最大值,對照組在第6天達到最大值,兩組除第1天較接近外,其余各天仿肝板組均高于對照組;兩組清蛋白分泌水平變化趨勢基本相同,在第3天達到最大值,第4天開始下降;仿肝板組ALT、AST、LDH-L在第3天下降到最小值,第4天以后變化趨勢和對照組相同;兩組α1AT除第5天外其余各時間點比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);兩組GSTα1分泌量隨時間持續(xù)上升,仿肝板組各時間點明顯高于對照組(P0.05);仿肝板組FⅦ分泌量前7d逐漸升高,對照組于第2天持續(xù)下降,仿肝板組第3天開始明顯高于對照組(P0.05);對照組細胞內(nèi)CYP1A2水平隨時間變化不明顯,仿肝板組從第4天開始明顯高于對照組(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建出一種仿肝板肝組織三維共培養(yǎng)模型,肝細胞功能有望得到長時間維持。
[Abstract]:Objective to construct a new three-dimensional co-culture model of hepatocytes by alginate hydrogel. Methods Sodium alginate hydrogel microfibers were prepared by sodium alginate, microfluidic chip, hepatocyte C3A and umbilical vein endothelial cell (EA.hy926). The double fluorescent labeling of living cells was used to verify the arrangement of two kinds of cells in the microfiber. The microfibers were cultured for 1 week. The morphology of the microfibers was observed, and the viability of the liver cells and the activity of the albumin (Alb), alanine aminotransferase (ALT),) were detected. The levels of aspartate aminotransferase (AST), lactate dehydrogenase (LDH-L), 偽 1-antitrypsin (偽 1AT), coagulation factor 鈪，

本文編號：2352413