【摘要】：目的:探討在Transwell間接共培養(yǎng)體系條件下,將成熟脂肪細(xì)胞作為誘導(dǎo)因素,觀察成骨細(xì)胞成脂橫向分化的可能性,為下一步進(jìn)行體內(nèi)實驗和進(jìn)一步臨床治療提供參考。方法:1.將3T3-L1小鼠成纖維樣前體細(xì)胞傳至3代,選取對數(shù)期的細(xì)胞加入成脂誘導(dǎo)液培養(yǎng)10d,用油紅O染色鑒定其為成熟脂肪細(xì)胞后,將成熟脂肪細(xì)胞作為誘導(dǎo)因素來誘導(dǎo)成骨細(xì)胞。傳代至第3代的MC3T3-E1小鼠成骨樣細(xì)胞設(shè)立為實驗組。選取上室下室面積之比為1:4,插入式Transwell培養(yǎng)板,將實驗組細(xì)胞和小鼠成熟脂肪細(xì)胞組細(xì)胞分別種于Transwell體系的上室和下室,并記為0d,對照組為用低糖DMEM單獨培養(yǎng)的MC3T3-E1小鼠成骨樣細(xì)胞。2.油紅O染色實驗檢驗實驗組和對照組7d、14d、21d 3個時間點的脂滴染色情況;3.茜素紅染色檢驗實驗組和對照組細(xì)胞在7d、14d、21d 3個時間點鈣化結(jié)節(jié)量的表達(dá)情況;4.以脂肪條件培養(yǎng)基(FCCM)培養(yǎng)基及低糖DMEM培養(yǎng)基分別培養(yǎng)小鼠成骨樣細(xì)胞,以MTT法在0h、24h、36h 3個時間點檢測實驗組與對照組的細(xì)胞增殖抑制率;5.檢測實驗組和對照組細(xì)胞在7d、14d、21d 3個時間點甘油三酯(TG)相對含量表達(dá);6.Western blot檢測各組細(xì)胞在7d、14d、21d 3個時間點成脂目的蛋白PPARγ2的表達(dá)含量。7.數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS19.0軟件分析,使用方差分析進(jìn)行組內(nèi)及組間的差異性比較、分析,以α=0.05作為檢驗標(biāo)準(zhǔn),實驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,P0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.鏡下觀察結(jié)果:成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)10d,前體脂肪細(xì)胞的形態(tài)由成纖維樣變?yōu)閳A形,胞質(zhì)內(nèi)脂滴聚集,經(jīng)油紅O染色后,鑒定為成熟脂肪細(xì)胞;實驗組細(xì)胞共培養(yǎng)7d細(xì)胞呈長梭形,細(xì)胞內(nèi)未見脂滴,14d時細(xì)胞呈成纖維樣,胞質(zhì)內(nèi)逐漸出現(xiàn)黑色顆粒物質(zhì)及少量脂滴,培養(yǎng)至21d,部分細(xì)胞由成纖維樣變?yōu)闄E圓形或圓形,胞質(zhì)內(nèi)脂滴增多;對照組細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)容及細(xì)胞形態(tài)未有明顯改變;2.油紅O實驗結(jié)果顯示實驗組細(xì)胞染色區(qū)呈遞增趨勢,對照組細(xì)胞染色區(qū)無明顯變化;3.茜素紅染色結(jié)果顯示實驗組細(xì)胞自7d、14d、21d呈鈣結(jié)節(jié)量表達(dá)減少的趨勢;對照組細(xì)胞在3個時間點則無明顯變化,呈大片著色區(qū);4.MTT法檢測結(jié)果顯示:實驗組抑制率分別為0h組(0.1947±0.09)%、24h組(64.917±2.4)%、36h組(71±2.3)%,對照組抑制率為0h組(0.1735±0.05)%、24h組(23.33±3.4)%、36h組(56.33±1)%,實驗組與對照組相比及實驗組組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),對照組組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);5.TG相對含量檢測結(jié)果顯示實驗組細(xì)胞甘油三酯聚集量呈遞增趨勢,隨時間的增長而增多,實驗組TG表達(dá)量為7d組(0.20167±0.015)、14d組(0.25167±0.024)、21d組(0.58167±0.023),對照組的表達(dá)量為7d組(0.22±0.027)、14d組(0.19667±0.025)、21d組(0.24±0.042),在3個時間點實驗組組間相比及實驗組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意(P0.05),對照組組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);6.Western blot實驗結(jié)果顯示:實驗組細(xì)胞PPARγ2蛋白表達(dá)量在3個時間點呈遞增趨勢,實驗組目的蛋白表達(dá)量為7d組(0.245±0.012)、14d組(0.40817±0.0365)、21d組(0.759±0.039),對照組的表達(dá)量為7d組(0.2781±0.043)、14d組(0.2955±0.022)、21d組(0.3849±0.03),而成熟脂肪細(xì)胞的目的蛋白表達(dá)量為7d組(0.9905±0.32)、14d組(1.1259±0.65)、21d組(0.98999±0.25),實驗組組間相比,實驗組與成熟脂肪細(xì)胞組相比,以及實驗組與對照組相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.在Transwell間接共培養(yǎng)體系中,成骨細(xì)胞在成熟脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)下呈現(xiàn)出成脂橫向分化趨勢,脂肪目的蛋白PPARγ2表達(dá)量與時間成正比,鈣結(jié)節(jié)量與時間成反比;2.實驗組成骨細(xì)胞與成熟脂肪細(xì)胞相比,目的蛋白PPARγ2表達(dá)量有明顯差異,實驗組細(xì)胞是否完全橫向分化為成熟脂肪細(xì)胞有待下一步考證;3.FCCM條件脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基能明顯抑制成骨細(xì)胞的增殖能力。
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【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R68

【參考文獻(xiàn)】

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1 王吉博;彭浩;王鳳宇;齊新文;王兆杰;;GJIC增強(qiáng)劑PGE_2對兔脂肪細(xì)胞向成骨細(xì)胞橫向分化的影響[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2014年09期

2 崔云英;田京;;骨髓脂肪細(xì)胞與成骨細(xì)胞分化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機(jī)制[J];中國骨質(zhì)疏松雜志;2013年07期

3 謝小偉;康鵬德;裴福興;楊靜;沈彬;劉忠堂;周宗科;;特異性阻抑DKK-1對小鼠脂肪細(xì)胞向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響研究[J];中國矯形外科雜志;2013年07期

4 張立智;蔣W，

本文編號：2276764