【摘要】：研究目的：在人類脊柱退行性中椎間盤退變是病變是重要的病因。研究證實椎間盤退變始于終板鈣化,且退變鈣化過程與新生血管形成相伴行,但具體作用至今不明。骨髓內(nèi)皮前體細(xì)胞(Endothelial Progenitor Cells, EPCs)有分化成正常人體多種細(xì)胞的可能,其與人體其他組織器官的新生血管形成有很大關(guān)系：在人體椎間盤退變過程中,椎間盤內(nèi)部的新生血管形成與退變鈣化的演進(jìn)過程有某種關(guān)聯(lián),其作用不僅只限于“管道”輸送,而是存在EPCs誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化直接參與鈣化進(jìn)程的可能。目前該領(lǐng)域尚未見相關(guān)研究報道。立足前期研究,本課題擬先構(gòu)建改良型的C57/BL6小鼠腰椎間盤退變模型,探討血管形成與椎間盤退變鈣化演進(jìn)過程相關(guān)性；通過GFP熒光鼠骨髓移植檢測在已建模型椎間盤病變進(jìn)程中EPCs定位表達(dá)情況,并通過血管生成調(diào)控揭示其與椎間盤退變鈣化的相關(guān)性。研究方法：1.1重新建立改良型的C57/BL6小鼠腰椎間盤退變模型,以此來探索小鼠椎間盤退變鈣化的進(jìn)程與椎間盤內(nèi)新生血管形成的相關(guān)性：(1)構(gòu)建BMP-2納米PLGA緩釋微球：改良乳化冷凍凝聚法制備載BMP-2納米PLGA微球：(2)穿刺法制造大鼠腰椎間盤退變模型：在L3/4僅顯露,不做處理(陰性對照),L4/5椎間盤注入每組相同劑量BMP-2納米微球(陽性對照),L5/6層面進(jìn)行針刺(實驗組)；(3)新生血管形成與椎間盤退變鈣化情況分析：椎間盤HE染色、免疫組化檢測和Vonkossa染色；(4)統(tǒng)計分析：椎間盤退變鈣化進(jìn)程與新生血管形成相關(guān)性。1.2研究骨髓EPCs與椎間盤退變鈣化、新生血管形成相關(guān)性：(1)改良腰椎間盤退變小鼠模型,經(jīng)骨髓滅活,移植GFP熒光小鼠骨髓,構(gòu)建EPCs與小鼠腰椎間盤退變鈣化新生血管形成相關(guān)性模型(2)明確退變鈣化椎間盤里EPCs定位、表達(dá)情況及其與新生血管形成、退變鈣化三者的相關(guān)性。結(jié)果：1、小鼠椎間盤退變、鈣化的檢測結(jié)果：①micro-CT掃描及重建顯示：小鼠L4/5、L5/6椎間盤高度逐漸下降。L5/6椎間盤有可見軟骨終板的硬化,椎體骨贅形成,L3/4椎間盤椎間盤高度未見明顯改變。②HE染色結(jié)果：椎間盤損傷后L4/5、L5/6椎間盤出現(xiàn)明顯退變征象。1月后椎間高度丟失、纖維環(huán)結(jié)構(gòu)紊亂并開始出現(xiàn)裂隙,髓核細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞外機(jī)制變性；3月后椎間盤高度繼續(xù)丟失,纖維環(huán)髓核結(jié)構(gòu)紊亂,炎性細(xì)胞浸潤。③Von kossa染色：3個月后L4/5椎間盤出現(xiàn)軟骨終板硬化,髓核鈣化。④免疫組化染色：3個月后椎間盤退變后髓核、纖維環(huán)、軟骨終板內(nèi)都有新生血管形成。⑤椎間盤內(nèi)新生血管形成于椎間盤退變、鈣化的相關(guān)性分析：根據(jù)Mann-whitney U檢驗：P=0.039,L4/5、L5/6椎間盤鈣化程度比較差別有統(tǒng)計學(xué)意義,L4/5椎間盤的鈣化程度高于L5/6。根據(jù)Mann-whitney U檢驗：P=0.019,L4/5、L5/6椎間盤新生血管量的比較有統(tǒng)計學(xué)意義,L4/5椎間盤的新生血管量高于L5/6。采用Spearman秩相關(guān)檢驗：新生血管形成與鈣化程度在L4/5、L5/6都有相關(guān)性(P0.01)。2、骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)與椎間盤退變鈣化、新生血管形成結(jié)果：①椎間盤EPC表達(dá)與椎間盤新生血管形成的比較：采用Spearman秩相關(guān)檢驗：EPC的表達(dá)與新生血管形成在L4/5、L5/6都有相關(guān)性(P0.01)。②采用Spearman秩相關(guān)檢驗：EPC的表達(dá)與鈣化程度在L4/5、L5/6都有相關(guān)性(P0.01)結(jié)論：①BMP-2納米PLGA微球的置入能夠促進(jìn)椎間盤的鈣化。在退變的椎間盤中,新生血管形成與椎間盤鈣化有相關(guān)性。②EPC在退變椎間盤中的表達(dá)及鈣化與新生血管形成相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R681.53

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本文編號：2276111