【摘要】：目的:利用經(jīng)皮內(nèi)鏡下腰椎間盤(pán)切除術(shù)獲取來(lái)源明確的髓核組織,結(jié)合組織塊培養(yǎng)法高效分離培養(yǎng)人髓核間充質(zhì)干細(xì)胞(human nucleus pulposus mesenchymal stem cells,hNP-MSCs),并鑒定其生物學(xué)特征。方法:收集6例腰間盤(pán)突出癥手術(shù)摘除的髓核組織,利用組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)。取第3~6代生長(zhǎng)良好的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),采用CCK-8檢測(cè)增殖能力;用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物;并分別向成骨、成脂和成軟骨方向誘導(dǎo)分化,用油紅O染色、茜素紅染色及阿利新藍(lán)染色對(duì)分化結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:成功從椎間盤(pán)內(nèi)鏡摘除的髓核組織中分離培養(yǎng)具有增殖能力的細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示細(xì)胞高表達(dá)CD29、CD44、CD90、CD73和CD105等間充質(zhì)干細(xì)胞抗原,不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD34和CD45。生長(zhǎng)曲線(xiàn)顯示符合正常間充質(zhì)干細(xì)胞增殖特征。茜素紅染色、阿利新藍(lán)染色及油紅O染色均呈陽(yáng)性,說(shuō)明分離培養(yǎng)的細(xì)胞具有向成骨、成軟骨和成脂肪誘導(dǎo)分化的能力。結(jié)論:首次結(jié)合椎間盤(pán)內(nèi)鏡微創(chuàng)手術(shù)和組織塊培養(yǎng)法,體外高效分離培養(yǎng)了具有自我更新能力和多向分化潛能的hNP-MSCs。
[Abstract]:Aim: to study the biological characteristics of human mesenchymal stem cells (human nucleus pulposus mesenchymal stem cells,hNP-MSCs) isolated from nucleus pulposus by percutaneous endoscopic discectomy. Methods: six cases of lumbar disc herniation were collected and cultured by tissue mass culture. The 3 ~ (th) ~ (th) passage well growing cells were used for the experiment. The proliferative ability was detected by CCK-8, the cell surface markers were detected by flow cytometry, and the cells were induced to differentiate into osteogenesis, fat-forming and cartilage formation, respectively, and oil red O staining was used. Alizarin red staining and alisin blue staining were used to detect the differentiation results. Results: the proliferative cells were successfully isolated from the nucleus pulposus tissues removed by endoscopy of intervertebral disc. Flow cytometry showed that the cells highly expressed mesenchymal stem cell antigens such as CD29,CD44,CD90,CD73 and CD105, but did not express the markers CD34 and CD45. of hematopoietic stem cells. The growth curve was consistent with the proliferation characteristics of normal mesenchymal stem cells. Alizarin red staining, alisin blue staining and oil red O staining were positive, which indicated that the cells isolated and cultured had the ability to differentiate into osteogenesis, cartilage and fat. Conclusion: in combination with endoscopic minimally invasive disc surgery and tissue mass culture for the first time, hNP-MSCs. with self-renewal and multipotential differentiation was isolated and cultured in vitro.
【作者單位】： 暨南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系;暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科;仁伯爵綜合醫(yī)院 澳門(mén)醫(yī)學(xué)科技研究協(xié)會(huì);暨南大學(xué)理工學(xué)院生物材料系;
【基金】：中央高�；究蒲谢�(No.21615436) 廣東科技項(xiàng)目基金(No.2016B090913004);廣東科技項(xiàng)目基金(No.201508020035) 暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院科研培育專(zhuān)業(yè)基金項(xiàng)目(No.511005024)
【分類(lèi)號(hào)】：R681.5

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本文編號(hào)：2263933