【摘要】：背景:椎管內(nèi)應(yīng)用阿片類藥物是常用的麻醉鎮(zhèn)痛方式之一,椎管內(nèi)阿片類藥物鎮(zhèn)痛的同時(shí),很多患者可出現(xiàn)頭面部、頸胸部的皮膚瘙癢,更有甚者會(huì)因瘙癢而終止鎮(zhèn)痛治療。關(guān)于椎管內(nèi)阿片類藥物致癢的機(jī)制目前尚不完善,臨床上針對(duì)椎管內(nèi)阿片類藥物致癢的治療一方面會(huì)減弱阿片類藥物的鎮(zhèn)痛效果,另一方面對(duì)于瘙癢的緩解程度尚不十分確定。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)脊髓背角μ阿片受體(MOR)異構(gòu)體MOR1D為介導(dǎo)癢覺信號(hào)傳遞的特異阿片受體,MOR1D通過與胃泌素釋放肽受體(GRPR)形成異源二聚體,激活GRPR信號(hào)通路,產(chǎn)生瘙癢反應(yīng)。在阿片類藥物鎮(zhèn)痛和耐受中,組氨酸三聚體核苷結(jié)合蛋白1(HINT1)與蛋白磷酸酶C(PKC)共同介導(dǎo)了MOR的C端與N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)的NR1亞基之間的相互作用,由于痛和癢的相似性,NMDA受體與MOR1D的相互作用可能參與了椎管內(nèi)嗎啡致癢的過程。此外,谷氨酸為癢覺信號(hào)傳遞中重要的神經(jīng)遞質(zhì),而NMDA受體為谷氨酸受體,其激活可能參與了椎管內(nèi)嗎啡致癢的機(jī)制。因此,本研究旨在建立椎管內(nèi)嗎啡致癢模型的基礎(chǔ)上,探究NMDA受體的激活及抑制對(duì)椎管內(nèi)嗎啡所致皮膚瘙癢的影響,同時(shí)取小鼠腰段脊髓背角組織檢測(cè)NMDA受體信號(hào)通路活化的相關(guān)蛋白表達(dá)水平,以期揭示NMDA受體信號(hào)通路活化在椎管內(nèi)嗎啡致癢機(jī)制中的影響。方法:(1)建立小鼠椎管內(nèi)嗎啡致癢模型:選取C57BL/6雄性小鼠,隨機(jī)分為Na?ve組、生理鹽水組、嗎啡組(0.1μg、0.25μg、0.5μg、1μg)。采用鞘內(nèi)注射的方法,建立動(dòng)物模型,應(yīng)用錄像記錄鞘注30 min內(nèi)小鼠的瘙癢行為學(xué),通過計(jì)數(shù)搔抓次數(shù),評(píng)估椎管內(nèi)嗎啡所致皮膚瘙癢的程度。(2)探究鞘內(nèi)注射NMDA受體激動(dòng)劑對(duì)小鼠瘙癢行為學(xué)的影響:選取C57BL/6雄性小鼠,隨機(jī)分為生理鹽水組、NMDA組(5 nmol、0.5 nmol、0.05 nmol、0.005 nmol)。錄像記錄鞘注30 min小鼠的瘙癢行為學(xué),通過計(jì)數(shù)搔抓次數(shù),評(píng)價(jià)鞘注NMDA受體激動(dòng)劑對(duì)小鼠瘙癢行為的影響。(3)探究鞘內(nèi)注射NMDA受體激動(dòng)劑對(duì)椎管內(nèi)嗎啡所致皮膚瘙癢的影響:選取C57BL/6雄性小鼠,隨機(jī)分為生理鹽水組、嗎啡+NMDA組(嗎啡0.25μg+NMDA 0.05nmol;嗎啡0.25μg+NMDA 0.005 nmol;嗎啡0.1μg+NMDA 0.05 nmol;嗎啡0.1μg+NMDA 0.005 nmol)。錄像記錄鞘注30 min小鼠的瘙癢行為學(xué),通過計(jì)數(shù)搔抓次數(shù),評(píng)價(jià)NMDA受體激動(dòng)劑對(duì)椎管內(nèi)嗎啡致癢的影響。(4)探究鞘內(nèi)注射NMDA受體抑制劑劑對(duì)椎管內(nèi)嗎啡所致皮膚瘙癢的影響:選取C57BL/6雄性小鼠,隨機(jī)分為生理鹽水組、嗎啡+艾芬地爾組(嗎啡0.5μg+艾芬地爾0.1μg;嗎啡0.5μg+艾芬地爾0.5μg)。錄像記錄鞘注30 min內(nèi)小鼠的瘙癢行為學(xué),通過計(jì)數(shù)搔抓次數(shù),評(píng)價(jià)NMDA受體抑制劑對(duì)椎管內(nèi)嗎啡致癢的影響。(5)選取嗎啡0.5μg鞘注5 min后的小鼠腰段脊髓背角組織,利用Western Blot分析NMDA受體信號(hào)通路的NR2B、CAMKII等表達(dá)及磷酸化情況。結(jié)果:(1)單獨(dú)鞘內(nèi)注射嗎啡0.5μg后,可觀察到小鼠有明顯的搔抓反應(yīng),在30 min內(nèi)小鼠的搔抓次數(shù)與對(duì)照組相比顯著提高,在給藥后10 min內(nèi)的搔抓反應(yīng)最為明顯,在給藥10 min后小鼠的搔抓次數(shù)明顯減少。椎管內(nèi)嗎啡致癢程度與嗎啡劑量有相關(guān)性。(2)鞘內(nèi)注射NMDA受體激動(dòng)劑:不同濃度的NMDA受體激動(dòng)劑對(duì)小鼠的瘙癢行為學(xué)沒有影響,但鞘內(nèi)注射5 nmol、0.5 nmol NMDA后可觀察到小鼠有明顯的精神癥狀,給予0.05 nmol NMDA、0.005 nmol NMDA精神癥狀不明顯。(3)聯(lián)合應(yīng)用嗎啡+NMDA受體激動(dòng)劑:鞘內(nèi)注射NMDA可增強(qiáng)椎管內(nèi)嗎啡致癢程度,增加小鼠搔抓次數(shù),且明顯高于嗎啡組。(4)聯(lián)合應(yīng)用嗎啡+NMDA受體抑制劑艾芬地爾,鞘內(nèi)注射嗎啡0.5μg+艾芬地爾0.5μg可明顯緩解瘙癢反應(yīng)。(5)與對(duì)照組相比,Western Blot顯示鞘注嗎啡0.5μg后小鼠腰段脊髓背角的NMDA受體信號(hào)通路活化相關(guān)蛋白顯著增高。結(jié)論:(1)鞘內(nèi)注射嗎啡可以劑量依賴性和時(shí)間規(guī)律性引起小鼠的皮膚瘙癢;(2)NMDA受體激動(dòng)劑NMDA與嗎啡聯(lián)合鞘內(nèi)注射后可增強(qiáng)椎管內(nèi)嗎啡所致的皮膚瘙癢;(3)NMDA受體抑制劑艾芬地爾與嗎啡聯(lián)合鞘內(nèi)注射后可緩解椎管內(nèi)嗎啡所致的皮膚瘙癢;(4)鞘內(nèi)注射嗎啡后,小鼠的腰段脊髓背角NR2B、CAMKII等表達(dá)水平升高,提示NMDA受體信號(hào)通路活化參與了椎管內(nèi)嗎啡引起的皮膚瘙癢。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R614

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本文編號(hào)：2262090