發(fā)布時間：2018-10-10 14:10

【摘要】：背景:椎管內應用阿片類藥物是常用的麻醉鎮(zhèn)痛方式之一,椎管內阿片類藥物鎮(zhèn)痛的同時,很多患者可出現(xiàn)頭面部、頸胸部的皮膚瘙癢,更有甚者會因瘙癢而終止鎮(zhèn)痛治療。關于椎管內阿片類藥物致癢的機制目前尚不完善,臨床上針對椎管內阿片類藥物致癢的治療一方面會減弱阿片類藥物的鎮(zhèn)痛效果,另一方面對于瘙癢的緩解程度尚不十分確定。相關研究發(fā)現(xiàn)脊髓背角μ阿片受體(MOR)異構體MOR1D為介導癢覺信號傳遞的特異阿片受體,MOR1D通過與胃泌素釋放肽受體(GRPR)形成異源二聚體,激活GRPR信號通路,產生瘙癢反應。在阿片類藥物鎮(zhèn)痛和耐受中,組氨酸三聚體核苷結合蛋白1(HINT1)與蛋白磷酸酶C(PKC)共同介導了MOR的C端與N-甲基-D-天冬氨酸受體(NMDAR)的NR1亞基之間的相互作用,由于痛和癢的相似性,NMDA受體與MOR1D的相互作用可能參與了椎管內嗎啡致癢的過程。此外,谷氨酸為癢覺信號傳遞中重要的神經(jīng)遞質,而NMDA受體為谷氨酸受體,其激活可能參與了椎管內嗎啡致癢的機制。因此,本研究旨在建立椎管內嗎啡致癢模型的基礎上,探究NMDA受體的激活及抑制對椎管內嗎啡所致皮膚瘙癢的影響,同時取小鼠腰段脊髓背角組織檢測NMDA受體信號通路活化的相關蛋白表達水平,以期揭示NMDA受體信號通路活化在椎管內嗎啡致癢機制中的影響。方法:(1)建立小鼠椎管內嗎啡致癢模型:選取C57BL/6雄性小鼠,隨機分為Na?ve組、生理鹽水組、嗎啡組(0.1μg、0.25μg、0.5μg、1μg)。采用鞘內注射的方法,建立動物模型,應用錄像記錄鞘注30 min內小鼠的瘙癢行為學,通過計數(shù)搔抓次數(shù),評估椎管內嗎啡所致皮膚瘙癢的程度。(2)探究鞘內注射NMDA受體激動劑對小鼠瘙癢行為學的影響:選取C57BL/6雄性小鼠,隨機分為生理鹽水組、NMDA組(5 nmol、0.5 nmol、0.05 nmol、0.005 nmol)。錄像記錄鞘注30 min小鼠的瘙癢行為學,通過計數(shù)搔抓次數(shù),評價鞘注NMDA受體激動劑對小鼠瘙癢行為的影響。(3)探究鞘內注射NMDA受體激動劑對椎管內嗎啡所致皮膚瘙癢的影響:選取C57BL/6雄性小鼠,隨機分為生理鹽水組、嗎啡+NMDA組(嗎啡0.25μg+NMDA 0.05nmol;嗎啡0.25μg+NMDA 0.005 nmol;嗎啡0.1μg+NMDA 0.05 nmol;嗎啡0.1μg+NMDA 0.005 nmol)。錄像記錄鞘注30 min小鼠的瘙癢行為學,通過計數(shù)搔抓次數(shù),評價NMDA受體激動劑對椎管內嗎啡致癢的影響。(4)探究鞘內注射NMDA受體抑制劑劑對椎管內嗎啡所致皮膚瘙癢的影響:選取C57BL/6雄性小鼠,隨機分為生理鹽水組、嗎啡+艾芬地爾組(嗎啡0.5μg+艾芬地爾0.1μg;嗎啡0.5μg+艾芬地爾0.5μg)。錄像記錄鞘注30 min內小鼠的瘙癢行為學,通過計數(shù)搔抓次數(shù),評價NMDA受體抑制劑對椎管內嗎啡致癢的影響。(5)選取嗎啡0.5μg鞘注5 min后的小鼠腰段脊髓背角組織,利用Western Blot分析NMDA受體信號通路的NR2B、CAMKII等表達及磷酸化情況。結果:(1)單獨鞘內注射嗎啡0.5μg后,可觀察到小鼠有明顯的搔抓反應,在30 min內小鼠的搔抓次數(shù)與對照組相比顯著提高,在給藥后10 min內的搔抓反應最為明顯,在給藥10 min后小鼠的搔抓次數(shù)明顯減少。椎管內嗎啡致癢程度與嗎啡劑量有相關性。(2)鞘內注射NMDA受體激動劑:不同濃度的NMDA受體激動劑對小鼠的瘙癢行為學沒有影響,但鞘內注射5 nmol、0.5 nmol NMDA后可觀察到小鼠有明顯的精神癥狀,給予0.05 nmol NMDA、0.005 nmol NMDA精神癥狀不明顯。(3)聯(lián)合應用嗎啡+NMDA受體激動劑:鞘內注射NMDA可增強椎管內嗎啡致癢程度,增加小鼠搔抓次數(shù),且明顯高于嗎啡組。(4)聯(lián)合應用嗎啡+NMDA受體抑制劑艾芬地爾,鞘內注射嗎啡0.5μg+艾芬地爾0.5μg可明顯緩解瘙癢反應。(5)與對照組相比,Western Blot顯示鞘注嗎啡0.5μg后小鼠腰段脊髓背角的NMDA受體信號通路活化相關蛋白顯著增高。結論:(1)鞘內注射嗎啡可以劑量依賴性和時間規(guī)律性引起小鼠的皮膚瘙癢;(2)NMDA受體激動劑NMDA與嗎啡聯(lián)合鞘內注射后可增強椎管內嗎啡所致的皮膚瘙癢;(3)NMDA受體抑制劑艾芬地爾與嗎啡聯(lián)合鞘內注射后可緩解椎管內嗎啡所致的皮膚瘙癢;(4)鞘內注射嗎啡后,小鼠的腰段脊髓背角NR2B、CAMKII等表達水平升高,提示NMDA受體信號通路活化參與了椎管內嗎啡引起的皮膚瘙癢。
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【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R614

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10 陳文玲,楊s，

本文編號：2262090